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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论文集
1型鸭疫里默氏杆菌patatin样磷脂酶基因的功能研究
廖申权★，袁建丰★，覃宗华，蔡建平，谢明权
(广东省农业科学院兽医研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室，广州510640)
磷脂酶广泛存在于动物、植物和细菌体内，是专一性水解甘油磷脂的一类酶。细菌磷脂酶是致
病性细菌重要的毒力因子之一，参与致病菌入侵宿主细胞过程。近几年来，革兰氏阴性菌磷脂酶的
研究已经取得了很大进展，但在鸭疫里默氏杆菌的研究中仍未见磷脂酶的相关报道。根据本实验室
构建的RAI基冈组表达文库及M基冈筛选获得一长444
bp的Raplp部分序列，以改良的
SiteFinding．PCR方法延仲序列，扩增获得了一长4662bp的序列。生物信息学分析显示，Raplp基因
的完整ORF为2061 aa，与其它物种PLP氨基酸序列的相似性最高为23％，
bp，推导氨基酸为686
具有保守活性位点Serl6-Aspl60。
coli
TF及宿主菌E
本研究利片jl原核表达载体pCold
得到与预期大小一致的融合蛋白为126．1
acid，ANS)作为疏水探
到单一的目的条带．应用8．苯胺基．1．萘磺(8．Anilino-I．naphthalenesulfonie
针，测定体外重组表达酶的活性，进行了酶动力学与抑制动力学分析，结果显示rRaPLP对十四酰磷
nmol／min·
应用甲基花生四烯酸氟化磷酸酯(methylarachidonyl
步的抑制动力学分析，MAFP对rRaPLP抑制的IC50分别为：0．81：L-O．07洲。
II
pBluescriptSK构建带有ermB基因的同源重组臂zlplp：：erm，将得到的同源重组臂连接到带蔗糖敏
为供体菌，RAI型菌株为受体菌进行接合转移。以含有红霉素及蔗糖的培养基直接筛选突变体，结
表达。将突变体Radplp：：erm与亲本菌株进行OD600测定，绘制生长曲线，结果表明突变体与亲本菌
株的生长曲线没有明显变化。突变体毒力试验表明Radplp：：erm毒力较亲本菌株降低了l倍。
的水解活性，MAFP对rRaPLP的体外酶活性具有抑制作用。以同源重组的方法构建突变体
anatipestifer的潜在致病因子。
科学院兽医研究所所长皋金资助．
作者简介：袁建丰(1978--)，男，汉族，江苏宜兴人。博士，主要从事病原细菌学研究。E-maih
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