白菜BcRALF基因启动子分离.pdfVIP

园艺学报201l，38(增刊)：2538 http：／／删alas．扯．clI Sinica Ac唯Horticulturae 白菜BcRALF基因启动子的分离 阮玉蓉，胡 帅，王芳展，刘振宁，刘亚培，余小林+ (浙江大学蔬菜研究所，农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室，杭州310058) Alkalinization 快速碱化因子(Rapid Factors，RALF)是最早从烟草叶片中发现的一类多肽信号 类物质。本研究中在已分离得到白菜Bc删￡聘因全长序列的基础上，采用T—也．PCR技术克隆获得 克隆到的启动子序列进行分析，寻找转录因子结合位点和作用元件。通过启动子缺失分析法研究该 启动子的结构和功能，并比较不同类犁启动子对删罐冈的驱动差异，为精确调控占cRA罐因 在植物体内的表达和深入分析BcRA廿瑾因的生物学功能奠定研究基础。 材料为白菜‘矮脚黄’核不育两用系。TAIL．PCR方法如下：取50 ng白菜DNA，在20皿体 系中，以SPI与6个简并引物分别配对，进行第1次PCR扩增，所得产物稀释40倍后取l止作模 板，以SP2和相应的简并引物开始第2次PCR扩增，所得产物稀释10倍后取l皿作模板，以SP3 之间的大小差距相当的扩增产物。将第l组的第3轮扩增产物中的目的片段回收，并分别克隆到T 载体上。经转化、蓝白斑筛选及酶切检测，获得目的重组子。结果显示，该BcRALF基因启动子序 列为792 比例为67．68％，C+G的比例为32．32％，符合启动的碱基组成。该启动子区含有丰富的顺式作用元 box，TATA box其核 件。该序列含有TATAbox等启动子特有元件，分别在．50、-459有2个TATA 处有1个EBOX元件CANNTG；在-480处存在1个Y1rCAN，nY元件；在．264位置存在1个MYC 元件；在．783位置有TATCCA元件。此外，在启动子的反向互补链上也发现一些重要的功能元件， box、 5个GATA box、2个GTGA元件、1个MYC识别位点，调节盐和病原物诱导下基因表达的抗性相 应元件。目前正通过瞬间或稳定表达转基因的方法确定该启动子的表达特性。 关键词：白菜；快速碱化因子(鼬虬F)：启动子；分离 中图分类号：S634．3 文献标识码：A 文章编号：0513．353X(201I)S-2538-01 收藕日期：2011—09—12 项目( ’通信作者(E-maR：xlyu@zju．edu．ca：Tel：0571