靶向VEGF稳定干扰质粒对人纤维肉瘤HT1080细胞影响.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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靶向VEGF稳定干扰质粒对人纤维肉瘤HT1080细胞影响.pdf

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靶向VEGF的稳定干扰质粒对人纤维肉瘤HTl080细胞的影响曾丽芬边春景杨卓王世华赵春华摘要目的血管在肿瘤的发生发展中起着重要的作用，为肿瘤的生长提供必需的物质交换。血管的新生受到多种调控因子的控制，其中血管内皮生长因子VEGF是主要的正调控因子之一。对VEGF及其相关蛋白进行深入研究，有利于了解血管形成的过程，为肿瘤治疗、肿瘤预后开辟了新途径。人纤维肉瘤HTl080细胞是高度恶性的肿瘤细胞，该细胞中VEGF高表达，裸鼠体内成瘤性好，是我们理想的研究媒介。本研究主要目的是通过RNA干扰技术实现对 pSilencer pCD—s“encer：设计并合成靶向VEGF的三条干扰序列；构建靶向VEGF的稳定干扰质粒和对照质粒Mock；脂质体转染HTl080细胞，36小时，RT—PCR和westernblot检测干扰效率：株，扩大培养后，ELISA法和westernblot法检测VEGF分泌量，从而获得干扰效果最好的稳定细胞株HTl080一V382和对照细胞株HTl080一M；克隆形成和生长曲线法检测细胞增殖情况：利用铺有Matrigel的Transwell评价细胞对基底膜的侵袭能力：划痕实验检测细胞的运动迁移能力：采用同种粘附和异种粘附实验检测了HTl080细胞自身之间及对血管内皮细胞的粘附作用；采用裸鼠体内异种移植模型来检测以VEGF为靶点的shRNA稳定表达载体 ELISA和western pCD—V382在体内抑制肿瘤增殖的作用。结果1 blot结果表明，但对脐静脉内皮细胞的粘附能力却没有变化；体内成瘤实验结果显示VEGF低表达可显著抑制肿瘤的生长。HTl080组和HTl080一M组分别于第9天和第15天出现可触摸的肿瘤，并且此后肿瘤生长迅速，而HTl080—V3组直至观察结束时的第54天尚未出现明显瘤块。结论 VEGF的低表达能显著降低HTl080细胞运动迁移和侵袭能力，并能促进同种细胞间的粘附能力，但对HTl080细胞与内皮细胞的粘附及HTl080细胞的增殖无明显影响；干扰VEGF可以抑制HTl080细胞在裸鼠体内的肿瘤生长，该抑制作用与细胞的生长无关，而是VEGF低表达后，肿瘤组织周围血管难以形成，无法供给肿瘤继续生长所需要的营养物质和氧分，导致肿瘤的生长受阻所致。关键词人神经纤维肉瘤细胞VEGFRNA干扰 R735．264 文献标识码A 中图分类号R730．231 lineHTl080 InfluenceofVEGF—RNAionhumanfibrosarcomacell 通讯作者：赵春华北京协和医学院基础学院组织工程中心作者单位：北京协和医学院基础学院组织工程研究中心地址：北京东单三条五号，邮编：100005 电话：010E—MAIL：璺b丛nb婪垒圣堡乜坠b!i璺：主巳圭：主j：曼卫