北京油鸡胚胎肝脏间充质干细胞分离培养和生物学特性研究.pdfVIP

2012，VOLUME1 ANIMAL 3，NO．1 BIOTECHNOLOGYBULLETIN 29 北京油鸡胚胎肝脏间充质干细胞分离培养及生物学特性研究 牧仁k2，李向臣1，王凤龙2，关伟军H，马月辉” (1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193： 2．内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特010018) 引言 stem cells，HSCs)，间充质干细胞 肝脏间充质干细胞(Hepaticmesenchymal 干细胞来源于中胚层间充质，主要存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量 最为丰富。目前，研究较多的MSCs主要是来源于骨髓、脐血、外周血和脂肪组织；肝脏 中充质干细胞的研究比较少，而禽类的肝脏充质干细胞的研究更少，所以本实验选择家 禽肝脏间充质干细胞作为研究对象。 材料方法 无菌条件下取孵化6—7d北京油鸡胚胎，分离胚胎肝脏，置于PBS中漂洗5-7次，剔除 肝脏包膜及大血管，轻压肝脏挤出血液，加入0．125％胰蛋白酶PBS溶液消化法获得细 胞，接种60mm培养皿中，贴壁培养细胞。对传至3、9、15、20代的HMSCs进行间充质 分化，检测Collaget)，pe 况，甲苯胺蓝染色观察结果。 结果 倒置显微镜下观察细胞，12h后细胞开始贴壁，细胞形态为梭形或纺锤形，有少量克 隆状肝卵原细胞，随着细胞密度的增加细胞呈有规律地平行排列细胞融合至80％一90％时， 按l：2传代培养；随传代的增加卵圆细胞克隆消失。对第3代、第9代、第15代、第20代 HMSCs免疫组化检测间充质干细胞标志CD29、CD44呈阳性表达，卵原细胞标志K19、 阳性表达。检测删SCs周期结果显示，随着细胞代次的增加，S期细胞所占比率逐渐降 低。向心肌细胞诱导后，HMSCs无显著心肌细胞样变化，RT-PCR检测心肌细胞标志物呈 阳性表达。向脂肪细胞诱导后，细胞形态逐渐发生变化，形成大而圆的脂滴，RT-PCR检 ；澳IJLPL、PPARy呈阳性表达。向成骨细胞诱导后，茜素红染色可见大而红的钙结节，RT- PCR检测CollagetypeI、Osteopontin呈阳性表达。向神经细胞诱导后，甲苯胺蓝染色可见 蓝染尼式体，R1-PCR检测Nestill、NF呈阳表达情况 讨论 本试验采用胰蛋白酶联合消化法成功分离纯化了HMSCs，并对其进行了鉴定。并将 HMSCs诱导为心肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞和神经细胞，说明了HMSCs具有问充质干 细胞特性，为今后肝脏干细胞研究及间充质干细胞的研究提供一定的参考。 关键词：北京油鸡；肝脏；间充质干细胞 2011ZX08012—002-06)、基本科研业务项目(201 lcj-9)和国家家养动物种质资源平台项目 (2012)资助。 ·通讯作者：关伟军，男，1966年生，教授，博导，E-maihwjguan86@iascaas．netcn； 马月辉，男，1964年生，研究员，博导，E-maih Yuehui．ma@263．net。