蜂房挥发油的提取、分析和生物活性的检测.pdfVIP

P-104 蜂房挥发油的提取、分析及生物活性的检测 AND OFEXTRACTIoN、ANALYSIS MEASURE EXTRATINGOIL INFENGFANG ACTIⅥTY 赵维成、逯晓波、陈立群、梁良·、崔越· 辽宁省肿瘤研究所 摘要 目的：对蜂房挥发油组分的提取分析及生物活性进行研究，方法：采取液质联用及气相色谱分析细 胞毒实验方法。结果：提取物中含有四特丁基焦儿茶酚、硬脂酸软脂酸等多种成分，并具有抑癌活性。结 论：通过上述研究为蜂房的药用研究及开发奠定基础。 关键词：蜂房软脂酸气相色谱生物活性 蜂房为胡蜂科昆虫大黄蜂或近缘昆虫的巢。历代草药学家均将蜂房用于临床，将其作为治疗痈肿、町 毒等病的常用药．近年来报道关于蜂房治疗肿瘤的报道也常见。但对蜂房的成分分析报道较少，本课题 组将蜂房进行有机成分提取，井将蜂房提取成分进行分析及生物活性检测，现将结果报道如下： 1材料与方法： 1．1蜂房中挥发油的提取：将购于天益堂药房的正品蜂房50克，去除灰尘、死蛹、粉碎，置于挥发油提取 挥发油含量． 1．2定量分析挥发油成分，上方法提取的挥发油用液质联用方法定性，与国际标准谱图对比，证明其中含 有四特丁基焦儿茶酚、硬脂酸软脂酸等多种成分。 气相色谱仪．载气为经酸洗并硅烷化处理的白色硅藻土。柱长为2m×3mm玻璃柱。填料为 300 kPa柱温150C。恒 ml具塞瓶中，加乙醚50ml浸泡过滤。 温12分钟．样品处理：精密称取正品蜂房5克，剪碎，置于100 移入样品瓶中，挥去乙醚．残渣中加入甲酵3ml，在60C下溶解，冷却后加硫酸0．5mI，充分混匀，放置 ml’萃取3分钟，静止分层，取上清夜进行色谱分析。每克蜂房中 10分钟，加水5ml，精密加入正庚烷2 含软脂酸O．92—1．02 mg，实验中要注意甲酯化必须完全，色谱仪运行稳定后方可进样。 1．4生物活性检测：体外药物敏感实验MTT法，(四唑盐比色实验)是～种检测细胞存活和生长的方法， 实验所用四唑盐是一种能接受氢原子的染料，活细胞中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性 的兰紫色结晶物并沉积于细胞中，而死细胞无此功能。二甲基桠枫能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联衔 疫检测仪在490纳米波长处测定其吸收量，MTT形成量与细胞数成正比．选用生长良好的肝癌H22、胃癌 mg／ml、 个细胞接种子96孔培养板中，每孔体积170毫升同时加入不同浓度的蜂房提取液30毫升，(按200 150 m咖I、12．5mg／ml、6．25mg／ml梯度浓度)，另设空白对照孔，加入30微升培 rag／rot、25 m咖l、50 内上清夜加入50毫升DMOS，震荡10分钟，使结晶充分溶解在酶联免疫检测仪上490纳米测波长，计算活 细胞生存率． 2结果 经检测蟓房中含挥发油4—6‰毫克／克，含软脂酸以甲酯计0．92．1．02毫克，克，蜂房提取物含四特丁基 ·沈阳药科大学 焦儿茶酚、硬脂酸软脂酸等多种成分。 提取物浓度耋!堡坚竺型墅壅坚!!：重堡!!!塑堕薹垡苎型焦星————一 48．5 43．4 3580．738·7 3235．233·2 3121．．45jl·4 26．82．5rz60 —丽(m丽g／m丽1)犷—百200r—j1万50 肝癌抑瘤率％ 曼塑塑塑奎兰 i!：! !!：! 竺：! 一．!．!：!—