表达B7分子肺癌融合细胞刺激主动免疫应答.pdfVIP

100 中国癌盎研究进展@ 表达B，分子的肺癌融合细胞刺激的主动免疫应答 林苹张洁陆燕蓉黄孝忠宁其志 近年来，对肿瘤疫苗的研究已成为肿瘤免疫治疗备受关注的热点之一。而多数肿瘤细胞 低表达或不表达B7分子是逃逸抗肿瘤免疫作用的重要原因之一f】]。为此，我们制备了小鼠肺 癌细胞株与活化B淋巴细胞融合的细胞，研究了其融合细胞诱导的抗肿瘤免疫应答。 材料与方法 卜一)细胞株及动物 ． 瘤研究所。AI 规贴壁培养。 (=)主要试剂 15％小牛血清，100肛g／ml青霉素，100耀／hd链霉素。聚乙二醇(PEG)：分子量4000，Merck 司。 (三)融合细胞的制备 B7筛 选，获得所需的小鼠融舍细胞FuB2c。 (四)融合细胞岛分子表达检测 将FLEk、^IA9702细胞制成细胞涂片，丙酮4℃固定后，加MAbB75,ug／ml4℃过夜(18～ 20 h)后，按常规进行SP免疫组化染色，显色后，光镜下以显棕黄色为阳性反应。 {五}体外刺激淋巴细胞增殪反应 MMC3712处理l 分别将FLB2c和LA∞5细胞用100,ug／mlh，调细胞浓度为5×105／ml，作 为刺激细胞。收取小鼠脾淋巴细胞，制成5×106／ml细胞悬液，各取刺激细胞和脾淋巴细胞按 h后，加DMSO 每孔100脚在96培养板中37℃、5％CCh条件下培养96h，加MTTl0出／孔4 150脚／孔，在酶标仪以570In波长测定A值。计算增殖指数： 增殖指数=塞壁冬纛手罢盟量 (六)体内刺激免疫反应及免疫保护应答试验 本课题受国家自然科学基金项目资助 作者单位：610041成都，华西医科大学附属第一医院肿瘤中心肿瘤研究所 表选岛分子的肺癌融合细胞刺激的主动免疫应簪 101 鼠．每周1次。共2次。另设生理盐水做空白对照，每组5只，雌性，在第二次免疫1周后用 性醋酸酯酶(ANAE)测定，并计算肿瘤形成率及瘤重、脾重和胸腺重。 结 果 、 (一)融合细胞岛分子的表达 MAb砩S-P免疫细胞化学显示，呱细胞呈阳性染色，能较高地表达B7分子；而 AIA蜘2细胞呈阴性反应，不表达岛分子。 (二)体外淋巴细胞增殖反应 Fukc细胞能在体外培养中刺激正常小鼠淋巴细胞增殖，而LA彳95则不能(表1)。 裹1体外脾淋巴细胞增殖反应 注：P001 (三)体内刺激免疫反应 2)。 裹2体内剌激免疫反应结果【i±F) 注：FⅡk与L山郧相比，P0．01 (四)体内免疫保护作用 FI岛c免疫小鼠后，能延缓亲代肿瘤形成时间，降低其成瘤率(PO．05)，其形成实体瘤重 瘤块，病理切片HE染色证实为腺癌组织，与LA79s腋下形成瘤块相同。 102 中国癌症研究进展⑤ 注：FI岛c与LA．m、0．9％NaCI相比．P0．05 讨 论 近10年来，肿瘤疫苗研究日益广泛深人，成为备受关注的热点之一。制备肿瘤疫苗的关 键是提高免疫原性，而目前人类特异肿瘤抗原尚不完全清楚。以肿瘤细胞作为抗原，能表达多 种肿瘤抗原，刺激多克隆T细胞增殖，仍具较好的价值。为了提高肿瘤细胞的免疫原性，研究 者们采用了多种方法对瘤细胞进行修饰13J3，如细胞因子基因的导入，但单一基因导入