单柱蛋白二维液相色谱法对实际样品快速分离.pdfVIP

西北大学学报(自然科学版) 篇 2010年6月，第40卷专辑，J吼．，2010，、W．40，S．I． ·研究快报· ofNordlw伪t Joumal Scieme 矽 U茄v啪畸(NanlrmEdid∞) rJNwU 单柱蛋白二维液相色谱法对实际样品的快速分离 柯从玉1，孙妩娟2 (1．西安石油大学化学化工学院，陕西西安710065；2．陕西理工学院化学化工学院，陕西汉中723001) 摘要：目的提出了用一根色谱柱来实现离子交换和疏水色谱快速分离整体蛋白的新方法。方法 采用二雏色谱柱为研究对象，通过考察其对标准蛋白和实际样品的分离来研究单柱二维色谱法 在实际分离中的应用。结果在选择合适的固定相、流动相、缓冲液交换方法及二次进样的条件 下，在lh内用同一根色柱完成了通常用两根色谱柱和在两种流动相条件才能实现的“二维色谱” 分离。结论通过对人血清蛋白的分离结果证明，将单柱二维色谱用于未知样品中蛋白的快速预 分离，特别是为在蛋白组学研究中，在样品来源极其有限的情况下，为进行活性蛋白预分离提供了 一种新的解决思路。 关键词：蛋白质组学；二维液相色谱；疏水相互作用色谱；离子交换色谱 ．， 中图分类号：065 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(20lO)03舵19也 蛋白质组学的早期研究是将未知功能蛋白降解 色谱分离图。因俚．淀粉酶和胰岛素(峰1)为酸性 为多肽后以MALDI—ToFMS方法进行解析，然后从 蛋白，肌红白(峰2)为中性蛋白，在IEC模式下这三 活性肽的肽片断中找出原功能蛋白并确定蛋白的结 构。另一种方法是先找出功能蛋白，再降解以寻找 E ，-、 功能肽原段。因后者勿须对非功能蛋白进行进一步 C J ∞ ： o 分析，从而大大减少了工作量…。然而这种预分离 N o g 、一 o U 必须保持蛋白分子的三维或四维结构不变，这就要 a d 矗 詹 求在温和的色谱条件下对整蛋白分子(intactpm￡ein o 毒 o 邑 童 U 啪kuks)进行尽可能快的预分离【2．3】，以防止在分 《 离过程中蛋白变性。如有一种特殊的色谱固定相， 能在两种单独模式下同时具备好的色谱分离功能， 就有可能用一根色谱柱以“离线”方式来进行该特 殊模式的2DLC蛋白分离，即单