苯中毒和SCE、PARP假基因多态等的相关性研究.pdfVIP

曼±至姿苎望望些堕兰查壅鎏叁笙塞兰塑 !窭堕塑窒! 苯中毒与SCE、PARP假基因多态等的相关性研究 广东省职业病防治院 杨爱初李森华(广州510300) 广州开发区疾病预防控制中。 陈 刚 中山大学分子医学研究中心 银巍任泽舫 山西医科大学研究生 王致 广州市职业病防治院 刘移民 关键词：苯中毒：假基因多态；研究 提供依据。 一、对象与方法 2．方法： 2×SSC溶液中，紫外光照射 加入lO“g／mlBUdR，收获细胞后常规制片，即标本静置4小时后，置预温到60(3 SCE频率，末端互换计为1次，中间互换计为2次，着丝粒处交换判明不是两单体扭转者计1次。 (2)DNA提取，采用大连BAOTAKE试剂盒，按其规定方法抽提DNA。 操作方法(以处理lOOul全血为例)： TLESolutionI 500ul。 ①按处理样品数准备1．5ml离心管，并各加入Gen TLESolution ②把混合均匀的100M血液，加入到分装好的Gen I的离心管中，并立即振荡几秒钟。 ③室温放置10分钟以上，然后在室温条件下12，000rpm以上离心5分钟。 ④用枪头小心地除去上清，加入1mlGenTLEsolutionII。 ⑤上下颠倒离心管数次，室温12，000rpm以上离心2分钟。 ⑥用枪头小心除去上清。 SolutionHI TLE 500ul，上下颠倒充分混合。 ⑦向离心管中加入Gen ⑧室温12，000rpm以上离心5分钟。 ⑨把上清移至另一个新准备的离心管中。 ⑩加入等积(500u1)异丙醇，上下颠倒离心数次，此时可看见DNA沉淀。 4C、12，000rpm离心5分钟，小心除去上清。 用70％L醇清洗沉淀，然后用真空泵等简单地进行干燥。 CCTTCAGC一3’， ACATCTGAG CCTTGTCAT AAGCCA CT一3’和5’一TTT 增PARP假基因片段。引物如下：5’一AAG 由上海生工生物：【程技术服务有限公司合成，该引物具有3’的错配和内错配，防止了在1号和14号染色体上 mmol／L MgCl21．6ul，10 相关PARP基因序列的扩增。PCR总体积20ul，其中含IOXPCR缓冲液2ul，25mmol／L 85． 墨±至墨兰里望些堕兰塑叁堡塞兰叁 。 !塞垦里墨! dNTPsO．4 2 ul，引物各0 u1)，1 ul(1umol／L)，约lug模扳DNA(1 PCR仪采用中山人学中山医学院分子医学研究中心提供的MJ A和B等位基因片段分别为595bp和402bp。 (4)资料整理及统计分析：采用SPSSl 1．0录入及T检验及卡方分析。 二、结果 1．外周血淋巴细胞微核率、姐妹染色单体交换率检测结