抵抗素介导线粒体数量变化的分子机理的研究.pdfVIP

’161。 畜牧与兽医2012年第44卷增刊 选用5．7日龄长白仔猪，采用胶原酶消化法，从背最长肌分离并纯化肌内脂肪前体细胞，并在分 laM)的肉豆蔻酸，诱导脂肪前体细胞分 化培养基中添加不同浓度(0¨M、10肛M、50IIM、100 化。在不同分化时间点(1天、3天、5天)观察细胞形态并进行油红O染色，并采用酶氧化法 PCR 检测胞内甘油三酯含量，同时采用内标法检测胞内脂肪酸含量及组成；同时采用Real-time 和WesternBlot检测细胞糖脂代谢相关基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果表明，肉豆 蔻酸能够剂量依赖性促进猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯，添加100uM肉豆蔻酸能够显著提高C14 脂肪酸和饱和脂肪酸的绝对含量，但对其它脂肪酸的含量无影响。实时荧光定量PCR和Western Blot检测结果表明，100“M肉豆蔻酸显著提高了脂肪细胞分化调控因子PPARy以及下游糖脂代谢 表达水平。上述结果提示，肉豆蔻酸可通过调控糖脂代谢相关基因的表达，促进脂肪前体细胞 的分化聚酯，并改变细胞的脂肪酸组成。 2．28抵抗素介导线粒体数量变化的分子机理研究 孟庆杰，周磊，龙欢，甘莉，雷霆，杨在清 (华中农业大学生命科学技术学院。农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，湖北武汉430070) 脂肪组织由大量的脂肪细胞构成，是机体能量代谢和储能的主要器官，其利用合成和分解 甘油三酯来维持机体的能量平衡。近年来研究发现，脂肪组织也是机体重要的内分泌器官，通 过旁分泌、自分泌和内分泌方式分泌一系列信号分子，例如：肿瘤坏死因子(TNF．仪)、瘦素 着至关重要的作用。 线粒体是～种高度动态的细胞器，这种现象首次先在酵母细胞中发现，在细胞内线粒体通 过融合与分裂的相对速度来决定其形态和数量，因此，线粒体DNA的复制成为检测细胞内线粒 体数量变化的一个标志。研究表明，肥胖、糖尿病以及胰岛素抵抗个体的细胞中会出现线粒体 功能异常和数量减少的现象。 抵抗素是近年来发现的一种重要脂肪细胞因子，可通过尚未发现的受体作用于脂肪、肝脏、 骨骼肌等胰岛素靶器官，影响胰岛素信号转导途径，改变机体的糖、脂代谢及能量调节，这种 作用是否与线粒体的动态变化及功能改变相关尚待深入研究。 本研究采用RT-PCR、mitoTracker 7514染色、western blot、免疫细胞化学和细胞转染等实验 技术，分别在细胞水平和活体水平上研究了抗素对线粒体数量及功能的影响，并探讨了抗素调 控线粒体数量变化的相关信号途径。结果如下： 可显著下调线粒体的数量。进一步分析与线粒体合成、融合和分裂的相关基因及脂联素受体基 畜牧与兽医2012年第“卷增刊 因mRNA的表达证明，重组抗素刺激导致细胞线粒体减少是因为线粒体合成受到抑制，AdipoR2 的下调也涉及此过程。 2．重组抗素刺激细胞后，利用JC．1、DHE染色和ATP检测方法，检测到线粒体膜电位上升， ATP含量显著下降，但ROS水平并无显著变化。表明重组抗素也影响线粒体的能量代谢功能。 3．油红O染色和甘油三酯测定分析重组抗素对细胞脂肪沉积的影响，结果发现，重组抗素促 进肝细胞脂肪的沉积。深入分析抗素处理后脂肪合成、氧化及极低密度脂蛋白输出相关基因 mRNA的表达及细胞内的甘油水平证实，重组抗素上调细胞内甘油三酯含量是通过抑制细胞内 脂肪酸氧化及抑制甘油三酯水解而实现的。 理和超表达过氧化物酶体增殖激活子1，共激活子ltz(PGC．1et)可抵消重组抗素对线粒体数量的下 调作用，抗体封闭拓样受体4(TUⅥ)可部分抵消抗素对线粒体数量的下调作用；Resistin处理 体数量的下调作用；从而认为抗素下调线粒体数量可能与TLR4．NFkB信号途径和eAMP信号途径 相关。 5．C57BL，6J小鼠尾静脉注射重组抗素的活体实验显示，重组抗素可下调活体细胞线粒