反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系P53表达影响.pdfVIP

K LM C 论文汇编 MLCCCC4002 IUU cDNA转导 瘤已取得了一些可喜的结果。研究表明191，将CD40L 的鼠肺癌细胞系注入同基因C57BL／6鼠上，同对照组相比， CD40L cDNA转导的鼠肺癌细胞系成功地排斥了肿瘤细胞的 生长；而在CD40阴性的小鼠，试验组和对照组没有差别，提示 对肿瘤细胞的排斥源于CD40／CDl54相互作用。进一步研究证EGFR的表达，由此增强了T细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能 实呻l，将协同作用的抗CD40抗体注人表达CD40的小鼠体内力，抑制了肿瘤细胞的生长。 能通过CD8叩细胞清除小鼠体内的肿瘤，而在CD40缺乏的小 Fas表达，但所有这些细胞系的生长受抑均未表现为细胞凋亡现 鼠上治疗无效，这表明，CD40L对肿瘤的治疗需要宿主细胞表 达CD40。 象，这说明CD40L并未引起Fas介导的细胞凋亡。 以上研究提示我们，CD40L作为免疫导向治疗的探针有可 能为肺癌治疗提供新的途径。本实验结果已表明(待发表)， CD40L增强了3种CD40高表达肺癌细胞系(如Calu一3)的Fas， ICAM一1和MHC—I类分子的表达和下调了EGFR的表达，并抑制系。 参考文献f略) 了细胞生长，阻断了细胞由s期进入G2／M期。但CD40L对 文中插图(略) CD40中低表达和不表达的肺癌细胞无明显影响。那么，CD40L对 这类肺癌细胞能否起作用?我们知道，CD40L是通过与CD40连 C：B-7 反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系P53表达的影响 马学斌韩为东都好杰李琦司艺玲 赵亚力 解放军总医院基础所分子生物室100853 徐周敏卢学眷解放军总医院血液科实验室 100853 帆RT及端粒酶活性与肿瘤的密切相关性使得其成为肿瘤 合成)与hTERT特异下游引物扩增，检测有无正向插入的重组质 治疗中的新的靶点Ⅲ。对hTERT表达调控的研究的进行得如火如粒。初筛后的菌落经扩增后提取质粒，进行PCR及酶切鉴定。 茶，但是，关于h1ERT对其他癌基因及抑癌基因得调控作用则研 1．3重组质粒的提取 究得很少，尤其hTERT对P53表达的影响至今未见报导。为了进 hTERT反义重组质粒．测定吸光度0D值。 一步探讨hTERT在肿瘤发生发展中的作用机制，本研究应用反 义hTERT转染人肺巨细胞癌细胞系PLA一801D，研究hTERT对1．4 PLA一801D细胞的稳定转染 P53表达的影响。 1．材料和方法 1 1细胞培养 反义重组质粒pcDNA川rhTERT进行转染，转染过程按试剂盒 人肺巨细胞癌细胞系PLA一801D细胞株系本室保存。采用 含10％胎牛血清的RPMl640(GIBCO)培养液，置37℃，饱和湿 度，5％C0：的培养箱中培养。 1．2反义表达载体的构建及鉴定 PLA一801D细胞命名为PLA一801DK。 选择pcDNA川1(Invitrogen公司)多克隆位点中的EcoRI插 1 5流式细胞术检测转染细胞周期的分布 入位点。EcoRl(华美公司)消化的pcDNA“㈦用CIP(Promega公 司)去磷酸化后，用玻璃奶试剂盒(Promgega公司)回收DNA片 段。同样方法回收