蓖麻毒素A链(ricin+A)蛋白的表达、活性和其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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蓖麻毒素A链(ricin+A)蛋白的表达、活性和其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用.pdf

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176 中国癌症研究进展⑤ 蓖麻毒素A链(ricinA)蛋白的表达、活性及其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用乔生军莫忠根椿琳扬瑶琴何祥火蓖麻毒素由A和B两条肽链组成，其中A链对细胞起毒性作用。天然毒素的A、B两条肽链上都有一些糖基如半乳糖等的受体，进入体内后会被迅速降解而失去毒性作用，从而降低或失去对肿瘤细胞的杀伤作用。蓖麻毒素A链基因在大肠杆菌中进行表达，因无糖基化修饰．克服了进人体内后被迅速降解的缺点，而且较天然毒素具有分子小、易于接近靶细胞的优点，同时A链基因活性表达，为进一步与单链抗体基因嵌合表达形成重组单链免疫毒素，对肿瘤进行导向治疗研究奠定了基础。斌妆s袁法 (一)材料 Sano博士提供【11；克隆化的蓖麻毒素A链基 pTSA-18F载体由美国波士顿大学Takeshi 因[2]和兔抗ricinA抗体由中国军事医学科学院沈倍奋教授提供；受体菌E．co／iBL21(DE3) DNA聚合酶购自 ’聚合酶Klenow大片段和低溶点琼脂糖凝胶均购自Pgomega公司,Taqplus Biometra公司；WIG购自Sigma公司；蓖麻毒蛋白购自上海金山制药厂。质粒DNA的提取和纯化采用常规方法。 (二)蓖麻毒素A链基因表达载体的构建 aAAGAACATNIT o玎gigGGAGGA ae3’ 通过蓖麻毒素A链基因上游引物[5’TA ATA (28rrH)]和下游引物[5-TGTAAGCTTACG h)，低溶点 PCR扩增出蓖麻毒素A链基因，T4．噬菌体DNA聚合酶处理，HindⅢ酶解(37℃，5 A基因表达载体回收酶解大片段；将回收的大片段与回收的目的基因ricinA连接，形成ricin pTSRA。构建过程如图1。 (三)蓖麻毒素A链基因转化子筛选和鉴定 h)，而在含有IPTG(1mmol／L)平板上 mg／m1)平板上生长(37℃，≥12 SPA，在含有Amp(0．1 列测定。作者单位：加0032上拇肿瘤研究所蓖麻毒素A链(d由A)蛋白的表达、活性爰其对人肺臃癌细胞sPc的毒性作用 177 pTSA’18F(2·7曲1 pUCl9(ricinAcloned) I l 咏sliOi．1wi血NdcI PcR跚叫i矗ed打cjnAd珥i“gece ● ‘ 14phageDNApolymerasetreatmentk1咖aw_¨inE 州鼍!!! I_ l甲Ⅲ r-——I 2298bp_—●■一812bD HindM-digestedlargefragment