白头翁汤体外抗内毒素活性作用的初步的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 白头翁汤体外抗内毒素活性作用的初步研究 杨彩霞，张涛，穆祥 北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室，．-Ik京昌平102206 白头翁汤源于张仲景《伤寒论》，由白头翁、黄连、黄柏、秦皮四味药物组成，具有清热解毒，凉 血止痢的功效。内毒素(endotoxin，ET)是大肠杆菌等革兰氏阴性杆菌菌体死亡溶解后释放出来的细 方剂之一，对产内毒素性大肠杆菌病具有显著的疗效，然而其作用机制尚未完全阐明。已有研究表明【l】， 药物对内毒素性疾病的治疗主要通过以下4个途径：①直接破坏内毒素的活性；②抗内毒素诱发细胞因 子的致炎作用；③改善微循环血液促进毒素的排出；④保护脏器组织细胞免受内毒素的伤害121。有关白 头翁汤及其成分在抗内毒素性炎症、改善微循环和保护脏器组织细胞的研究已有较多报道，而对内毒素 活性的影响尚不清楚。本研究初步研究了白头翁汤对内毒素活性的影响，为进一步筛选白头翁汤中抗内 毒素活性的成分及阐明其作用机制提供了基础。 l材料与方法 1．1材料 主要试剂和仪器：白头翁汤复方；布氏漏斗一套；真空泵；旋转蒸发仪；凝胶法鲎试剂(规格：每 瓶，厦门市鲎试剂实验厂有限公司，批号110301)；电热恒温水浴箱；旋涡混合器：微量移液器：无热 1．2方法 1．2．1白头翁汤汤剂的制备 根据药典记载，准确称取白头翁汤复方中各单味药的量：白头翁609，黄连309，黄柏459，秦皮 609。将四味药同时放入药罐中．加入10倍体积水浸泡30min。打开开关，调到快火，开始熬药。待水 沸腾后，将其调到慢火，维持沸腾30min，冷却至室温，将药液倒入大烧杯中。第二次加入8倍体积水， 重复第一次过程。然后滤液合并，过16层纱布，用布氏漏斗真空抽滤加入两层定性滤纸，转入另一干 净大烧杯中(保鲜膜封121)。将过滤后的药液倒入旋转蒸发仪(每次不超过体积的l／3)，水浴温度50℃， 转速3l，将复方浓缩到19／ml，装入无菌瓶内备用。 1．2．2细菌内毒素工作标准品的稀释 为5EU／mL的细菌内毒素工作标准品。 1．2．3鲎试剂灵敏度复核试验及干扰试验 方法参照2005年版‘中华人民共和国药典》中有关细菌内毒素检查法的有关章节131。 1．2．4白头翁汤抗内毒素活性的检测 作者简介：杨彩霞(1987．)，女，硕士研究生，中兽医学方向 1 ’通讯作者：E．mail：muxiangl09@sina．com，Tel／Fax：010 基金项目l北京市属高等学校hpJ-强教学术创新团队项目(PHR201007142) 254 中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 各lmL，取各浓度药液0．1m1分别放入去热原试管中。各管再加入5EU／mL的细菌内毒素工作标准品 进行鲎实验。每～种反应液平行做2管。各浓度同时以5EU／mL的细菌内毒素工作标准品作为阳性对照； 用细菌内毒素检查用水作阴性对照，另设各浓度的白头翁汤溶液作药物空白对照。此方法重复3次。 反应结束观察结果，试管中有完整的凝胶形成，且试管倒立凝胶未脱壁者表示内毒素活性未受到影 响；试管中完全无凝胶形成，表示内毒素完全丧失活性；试管中有部分凝胶形成，且试管倒立凝胶易脱 壁滑出者，表示内毒素活性受到部分破坏。 2结果 通过鲎试验凝胶法实验结果显示，白头翁汤有降低内毒素活性的作用，且浓度越大，降低作用越大 (见表1)。 表1鲎试验凝胶法白头翁汤抗内毒素活性作用结果 注：“+”表示完整凝胶形成，“一”表示无凝胶形成，“±”表示有凝胶形成，但试管倒立时不能保持完整并从臀 壁脱滑。 3讨论 3．1白头翁汤体外具有显著降低内毒素活性的作用 鲎试验凝胶法的基本原理为：鲎血变形细胞中含凝固蛋白原、凝固酶原、B因子和C因子。在微 量LPS参与下，C因子首先被激活，然后C因子激活B因子，B因子活化凝固酶原，最后促使凝固蛋 白原转为凝固蛋白，形成肉眼可见的胶冻状物质，然后通过生成凝胶的情况来判定内毒素活性。本试验 中，白头翁汤与内毒素作用后加入鲎试剂，反应没有产生凝胶或虽生成凝胶但倒立试管时却不能保持完 整并从管壁脱滑，所以内毒素经白头翁汤作用后活性降低甚至消失。