肺癌患者外周血循环细胞CEA-mRNA表达的检测和其临床意义.pdfVIP

中国癌症研究进展@ 肺癌患者外周血循环细胞CEA—mRNA 表达的检测及其临床意义 李旭莽郑树张行王炳 近半个世纪来，肺癌发病率与死亡率呈持续上升趋势。在我国一些大城市和欧美工业国 家，肺癌发病率已占男性恶性肿瘤的首位“oj。而临床上，约40％的肺癌病人在就诊时已有远 处转移，并失去手术治疗机会。而术后和放疗后病人亦常复发，常规化疗效果不甚理想。肺癌 患者的复发、转移仍是威胁患者生存的重要原因之一。因此，如何以敏感的方法及早检测出外 周血中循环肿瘤细胞与微转移灶的存在，并指导该部分病人及早进行有效的综合治疗具有莺 要的治疗和预后意义。检测循环肿瘤细胞的方法颇多。PCR方法由于较常规的方法更为敏 即是在PCR基础上发展起来的基因诊断方法，可快速扩增肿瘤细胞内的特异基因和DNA片 在所有的上皮细胞包括癌细胞中被检出，在非上皮细胞中则不能检出。因此在外周血中，若能 检测到CEA—mRNA的表达，即可推断有表达CEA的上皮细胞亦或肿瘤细胞的异位存在…。 作为一种检测消化道肿瘤特异性较高的肿瘤相关抗原基因。CEA—mRNA在胃癌，结、直肠癌 患者外周血中的表达已报道颇多”一]。但其在肺癌患者中的表达如何及其临床意义，国内目前 尚无报道，而国外报道也甚少。本研究以RT—PCR方法成功地检测了5l例肺癌患者外周血 中CEA—mRNA的表达，并与血清CEA蛋白的表达进行了相关分析。现将结果报道如下。 材料与方法 (一)病例选择 手术前或有明确临床转移病灶存在的肺癌患者共51例，其中腺癌2l例、鳞癌19例、小细 胞肺癌8例、大细胞肺癌3例，均已为病理学证实。男性37例，女性14例；年龄范围32—73 岁，平均年龄63．2岁。同时取健康志愿者37例，作为正常对照。 (--)主要试剂与仪器 CEA蛋白检测试剂盒(芬兰EGEGWallac lrmotech 凝胶紫外成像仪(A埘m Corporation)。 (三)方法 1．RT—P(R检测CEA—mRNA总RNA提取：取肝素抗凝外周血5ml，淋巴细胞分离液进 作者单位：310009杭州，浙江大学医学院附属第一医院肿瘤科(李旭芬王娴)；浙江大学肿瘤研究所(郑树 张行) 时癌患者井周血循环细胞cE^一mlINA表达的检测及其临床意义403 mol／L mmol／L 含反应缓冲液、0．1 flit、10 逆转录酶。37℃水浴1h。 巢式PcR：引物A：57一代爪Ⅺ从c11Ⅱ℃cIH邓咖AGcTDG一3’ 7I℃ATcAT’IGG一3’ 弓I物C：5’一GGGccAcTGTcGGCA 扩增片段：A+B=161bp，B+C=131bp。 扩增条件：CEA—mRNA第一轮扩增(引物A+B)：95℃5rain；95℃308，72℃1rain，20个 30 s，72℃ 循环；72℃10min。取第一轮扩增产物行第二轮扩增(引物B+c)：95℃5min；95C 1 rain，30个循环；72℃10rain。4℃保存。 结果观察：取第二轮CEA—cDNAPcR扩增产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，在紫外数字成 像仪下观察结果并成像。CEA阳性条带为131bp。 2．血清CEA蛋白的检测以时间分辨荧光法测定，具体操作遵循试剂盒说明书。以 cEA5耐础为阳性。 (四)统计学分析 阳性率的比较采用f检验。 结 果 卜一)肺癌患者与正常对照组外周血a强一mRNA的表达差异 CEA—mRNA表达阳性仅1例，阳性率2．7％。二者经统计学分析，存在着显著差异。 裹1肺癌患者与正