骨桥蛋白在大肠癌和大肠癌肝转移中的表达和其临床意义.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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骨桥蛋白在大肠癌和大肠癌肝转移中的表达和其临床意义.pdf

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骨桥蛋冉在大肠癌及大脑矮肝转移中的表达厘其临床意义 385 骨桥蛋白在大肠癌及大肠癌肝转移中的表达及其临床意义丁凌丁佳逸郑树特异的与细胞黏附有关的RGD序列，通过其受体整合素、CD44等可促进细胞的趋化、黏附和迁移Ⅲ。近年来对骨桥蛋白与肿瘤发生发展的关系已有一些研究，特别是骨桥蛋白与肿瘤转移的关系更日益引起人们的关注”J。大肠癌肝转移的发病率很高。美国每年新发现的大肠癌约15万人，其中1／4—1／3病例属于晚期。在这些晚期大肠癌的病例中，发生肝转移者占人死于肝转移。而在原发癌灶手术_田除后5年内，有50％病人发生肝转移。患结直肠癌的病人，当尸检时发现有肝转移者，可高达45％一71％【3J。大肠癌患者肝转移的高发已日渐引起了 I临床的关注。如何从分子生物学角度进行大肠癌肝转移机制的研究，为干预阻断大肠癌肝转移提供理论基础，是目前的研究热点之一。本文通过研究骨桥蛋白在大肠癌组织及肝转移组织中的表达和定位，探索其在大肠癌发生、发展及肝转移中的作用。资料与方法 (一)资料 44例大肠癌及癌旁相对正常组织标本取自浙江大学附属第二医院手术患者，均经病理证 (=)方法 1．RNA的提取分别取新鲜大肠癌及癌旁相对正常组织(距癌变边界15onl外)、大肠癌肝转移组织及正常肝组织各100 mg，在液氮存在下研成粉末，加入1 hotech)对其定量后分别行eDNA的合成和RNA电泳，后者用以判断RNA的质量。 2．eDNA的合成(50 ranol／L m反应体系)取RNA mol／L rain后，加人0．1 翊1PMixI脚，65℃加热5 rYfT2脚，Rrmsin40一，SUPER (CIBCO／h司)，42℃，孵育50min．70。CJIfl热15min灭活逆转录酶后，终止反应，所得eDNA用于 PCR扩增。 7rl’rCAC PcR AACCGAAGT 2400)扩增。骨桥蛋白的上游引物：5’一AC．C PCR(GeneAmpSystem 作者单位：310009杭州．浙江大学肿瘤研究所 386 中国癌症研究盎展@ TCA 7一TAATACGAC T优一3’，下游引物：5 C一37， 5 30 扩增片段为361 min，94℃30s，55℃45s，720cs，35个循环，循环结束 bp。PCR条件：94。C ccrTCCTIC 后72℃延伸7rain。内参照口一actin的上游引物：5’一TIECAGCrGGG一3’，下游 CGCTCAGGAGGAGcA 引物：5’一TrG AT一3’，扩增片段为250 min， bp。PCR条件：94℃2 94℃20