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方剂药动学样本预处理方法研究进展* 张莉黄熙**王骊丽 第四军医大学西京医院中药临床药理研究室 中医药现代化的关键问题之一是方荆药效物质基础的研究。有学者早已提出药动 一药效学统一模型的研究思路并明确提出了复方(单味药可认为是小复方)药动学的概 念，认为复方中的君臣佐使和剂量加重或减轻将会严重影响其药动学参数的变化L1j。因 此，在以血药浓度法研究方剂药动学中，有效成分的定性与定量尤为重要，气相色谱、气 一质联用，高效液相色谱，液一质联用，高效薄层色谱成为药物分析中首选的分析方法， 在应用这些技术时，血浆中待测成分的提取(包括简单的分离、纯化和富集)即预处理常 常是首要步骤之一。本文在借鉴西药的预处理方法的基础上．就近年来方剂药动学研 究中样本(主要是血样本)预处理方法作一回顾和展望，为这一领域的研究提供参考。 一、常用的西药血样预处理方法 1．1液一液萃取(u止)：利用药物在互不相容的两种溶剂中溶解性的差异，如血浆中 与有机溶剂，将被测定成分从一种溶剂中提取到另一种溶剂中。常用的有氯仿、乙醚等、 此法较适台于非极性或弱极性组分的提取，因目前西药的化学药品多为脂溶性的，因而 西药血样预处理多用此法【2j。 1．2固相萃取(SPE)：利用固相分离原理提取药物，具有快速、回收率高，无乳化现 象，样品用量少．同时提取多种药物成分等优点，。李莉等选用一种新型的紧压式三相混 性、中性和碱性西药在血浆中的绝对回收率，结果表明所测药物的绝对回收事在86％到 103％之间，相对标准偏差小于7％。作者认为，该系统化方法与灵敏度较高的GC—Fm 相结合，是一灵敏、快速、可靠的常见药物筛选方法。近年出现的新型微粒填料薄膜 取【45】。在临床药物浓度检测(TDM)中可以减少采样量，洗脱液不需进一步浓缩而直接 进样，可避免样品不稳定造成回收率降低，产生杂质等问题【6J。固相徽萃取技术是国外 近年来才发展起来的，集采样、萃取、浓缩、进样于一体的方法，具有不使用有毒有机溶 剂，操作简单快速、适用范围广等优点【7】。柱切换作为一项专门技术经常与各种色谱系 统相连起分离提取作用，利用切换阀使样品进入不同的色谱系统中达到样品净化、组分 富集等目的【8】，实际为一种在线固相分离技术。 1．3各种去蛋白方法加入有机溶剂沉淀蛋白，离心后取上清直接进样或浓缩后进样 ，甲醇、乙晴、丙酮和乙醇是最常用的蛋白沉淀剂。有人结合超声波振荡，提高了蛋白沉 淀效果，但样品的预处理时间延长较多。也有利用酸、盐或碱等使蛋白形成不溶性物离 心去除。如：高氯酸，三氯醋酸，磺基永杨酸等l引。超滤和透析也是一种去除蛋白或其它 大分子的方法，利用膜孔对体系中不同分子的筛分作用，将样品分离、纯化、浓缩或脱盐。 此法速度快，溶质转移影响因素小，同时可对样品进行浓缩，但需要微量的超滤装置。有 人用此法进行了甘草甜素与蟹自结合的研究啤】。在线透析和微透析技术是透析技术的 进一步发展(10)。 1．4化学衍生为提高检测灵敏度和选择性或为使没有紫外吸收的药品能在紫外检 测器测定，焉对样品在提取后进行衍生，但此法对样品有所要求：如对反应条件不苛刻， 且能迅速定量进行，对待测样品只能生成一种衍生物，无干扰，衍生荆方便易得，通用性 好等[11)。如钟大放用此法测定了血浆中卡托普利及其二硫键代谢总浓度u“。 二、方剂药动!学样本预处理方法 将方剂或复方看作为一种药品，如四君子汤、六味地黄丸等，体内有效成分检测主要 选择君药的主要有效成分的～种或两种或它们的代谢产物进行，如测定麻黄细辛汤中的 麻黄衷[1”、银黄冲剂中的黄芩甙‘“】、川芎丹参液中的川芎嗪【15】等，因此血样预处理也以 提取它们为主要目的。 2．1传统方法的大量应用无论是单昧药制成的注射液还是多喙药组成的复方，药动 学研究中血样预处理大多仍是沿用经典的液～液萃取，虽然LLE法存在许多不利方面， 科研人员根据不同情况在不断加以改进。有用一种有机试剂，有的用混合试剂。李全胜 等f16’研究源于中药马蔺子的马蔺子素(主要含马蔺子甲素86％)的药代动力学，以提取 和检测马蔺予甲素为指标，取血浆lrnl，加入内标，用混台试剂(正己烷一异丙醇=95：5)， 振荡提取，离心分离有机相，60℃氮气挥干残馨物加入200Ⅶ流动相振荡溶解后进样。 Y出hir0ocAKI等人测定了口服甘草甜素和甘草提取物后在大鼠血中的甘草甜素(GL) 浓度，进行了不同来源(H，的药动学特征对比，预处理采用LLE法…’；RieMInD等人 用疆毽