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大鼠皮下注射医用聚丙烯酰胺水凝胶后局部炎细胞浸润及 颈淋巴结DC聚集情况的动态变化 陈艳清 李世荣 第三军医大学西南整形美容外科医院(400038) 医用聚丙烯酰胺水凝胶是一种亲水性强、无色透明的聚合物类水凝胶，作为一种软组织填充剂 用于体表和体内各种凹陷性缺损的修复，聚丙烯酰胺水凝胶具有良好的生物相容性，符合国际标准 化组织所定可接受材料的评价要求，但由于制作过程中可能混入一些低分子物质，进入体内后会作 为一种抗原或半抗原激活免疫反应，目前关于这方面的研究国内外文献报道较少。树突状细胞 (dendritic cells。 cells，DC)，是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞(antigenpresenting veT APC)，在很多病理过程中唯一激活初始型T细胞(nacells)反应。Dc是否参与了机体对MPAHG 的反应及可能的机制目前还不清楚，国内外也未见系统性研究该材料对Dc影响的报道，本实验对其 进行初步的探讨。 一、材料与方法 1．主要试剂和实验动物 医用聚丙烯酰胺水凝胶(吉林富华)；液体硅凝胶(上海东月医疗用品公司)；膨体聚四氟乙烯 (美国Gom公司)；硅橡胶(上海东月医疗用品公司)；即用型兔抗鼠S一100多克隆抗体(武汉博士 德生物公司)；即用型SABC免疫组化染色试剂盒(武汉博士德生物公司)；健康雌性SD大鼠60只 (第三军医大学动物研究所)，体重150．，2009。 2．建立动物模型 皮下分别注射MPAHG、液体硅凝胶，每点注射lml；硅橡胶组及ePTEE组大鼠分别于肩胛骨内侧皮下 植入硅橡胶片、ePTEE片lmm×lmmXlmm。 3．术后观察与处理 术后1周、2周、1月、2月、3月、6月观察大体变化及包膜形成情况，并取注射点形成的包 膜及周阐组织作HE染色，观察淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞的浸润情况，免疫组化染色检测颈部 淋巴结内树突状细胞的表达变化。 4．HE染色 常规石蜡切片制作；常规HE染色。 5．颈部淋巴结树突状细胞S一100蛋白抗体免疫组化染色 常规石蜡切片制作；组织切片二甲苯脱蜡至水；3％过氧化氢室温孵育15分钟，以消除内源性 过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗2次，PBS浸泡5分钟；滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20分 钟，倾去多余血清，勿洗；滴加一抗工作液(兔抗鼠S一100)，37℃孵育l小时，再4℃冰箱过夜。 PBS液(PH7．2-7．6)冲洗3次，每次5分钟：滴加生物素化羊抗兔IgG，37℃孵育2小时，PBS冲 色，镜下控制反应时间，蒸馏水冲洗；苏木素轻度复染，脱水、透明、封片，显微镜观察。 6．S-100蛋白表达免疫组化评定 每组每时相点各选lO张切片，组织中阳性表达产物在统一放大倍数下，每张切片随机取5个视 野，高倍镜下观察，根据S-100阳性细胞的形态，刚显微测微尺计算每mm2DC的数量。 56 7．统计学分析 结果均用平均数和标准差(z 为相差显著，p0．01为相差非常显著，p0．05为差异不显著。 二、结果 1．注射点大体形态及包膜的动态变化 @MPAHG组：从注射开始直至实验结束，注射局部隆起与注射当时形成的隆起大小相近，且 固定于原注射位置，无明显移动，触之柔软，未触及硬结，局部无发红。1周时切开皮肤后即可见一 薄层透亮的包膜，柔软，有弹性，有一定韧性，不易破裂坏，表面可见毛细血管增生；2周至2月 包膜略有增厚，3月以后包膜厚度无明显变化，包膜质地柔软，表面可见少量毛细血管。②液体硅 凝胶组：1周时注射局部的隆起与注射当时形成的隆起相比较扁平，包块位置向腹部移动，触之柔 软，未触及硬结，切开皮肤可见一薄层透亮的包膜，柔软，弹性差，轻触包膜易破裂，并有材料溢 出，表面有少量的毛细血管增生，但不及PAHG明显；2周时包膜较1周时略厚，轻触包膜，未见破 裂，血管增生明显；此后包膜持续增厚，至6月时纤维包膜已经不透明。⑨ePTFE组：植入至整个实 验过程结束外观未见变化，几乎无移位。材料植入后，术后1周时，周围有反应性增生的纤维结缔 组织，2—4周时纤维包膜逐渐