表达PRRSV+M蛋白重组腺病毒的构建和其免疫特性研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 杆菌中得剑了正确表达并保留了与PRRSV阡l性血清反应的抗原性(图3略)。 3 讨论 或没有表达。一些研究表明玄除跨膜区或强疏水序列可明显提高蛋白的表达量，也可明显提高蛋白的溶解 性15】。戍川分子生物!学分析软{，{：对S1株ORF3基冈及其编码产物的氨基酸序列进行分折，在分析基因的酶 切何点以及预测蛋白的信弓肽序列、跨膜区及其抗原农位筲分子特征的基础上，我们切除了GP3N末端的 疏水序列，而保留了C未端抗原性较强的亲水序列，最终利用原核表达载体pRSET使ORF3基因得剑了 较好的表达，说明N末端的疏水序列对货白的表达莲有较大影响。 的GP3蛋自在C端比欧洲株少12个氨基酸，因而使二者的C末端性质不同，但是现在还不清楚这种差异 是否导致功能上的差异。目前对T-GP3是否是结构篮白也存在一定争议。对欧洲型毒株LV的研究表明16J， 其GP3是结构蛋白，而加拿大的Quebec 重叠处存在一高变区，该区域容易迅速变异，可能是受到免疫选择压力的结果，在免疫中有可能起重要作 用。虑件j单克隆抗体技术发现GP3蛋白中包含有中和表能，可以诱导机体产生中和抗体并能中和病毒，而 能具有一定的理论意义和实践意义。本研究在体外成功地表达了PRRSV的GP3蛋白，为进一步研究其免 疫特性、结构和功能奠定了基础。 参考文献略 表达PRRSVM蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究 汤景元，姜平‘，蒋文明，李玉峰，马苏 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京210095) 代，滴度稳定为】O 的特异性抗体免疫和细胞免疫应答反应，从而为PRRSV结构蛋白功能及其基因工程疫苗研究奠定了基础。 关键词：PRRSV；重组腺病毒：免疫反应；PRRSVM蛋自 J以米，迅速传 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)具有高度的传染性，自1987年首先发现于关国Il 遍了欧洲、美洲和皿洲的猪场。该病毒主要引起妊娠母猪流产和仔猪呼吸道疾病，给世界养猪业造成巨大 经济损失。但目前尚无理想的疫苗【2l。I天j此，新的PRRSV疫苗的研制已成为该病研究的热点之一。 结构蛋白，25kD的GP5蛋白，18．19kD的1I=糖基化囊膜蛋白M干u 217 猪传染病 可以通过二硫键与M蛋白形成异源二聚体，在二聚体中含有同病毒相关的免疫重要区。GP5和M蛋向诱 导的抗体能在体外中和病毒的感染【3】，腺病毒载体具有容纳外源基因能力强、介导外源基因的表达水平高、 表达产物具有天然蛋白质的活性及使用安全性高等优点【45。6】，已被广泛用于基因工程疫苗研究。本研究在 GP5蛋白重组腺病毒的基础上进一步构建表达PRRSVM蛋白的重组腺病毒，并观察其 成功构建PRRSV 免疫效果，现报告如下。 1材料与方法 1．1试验动物、细胞株与毒株 QbioGene公司，PRRSV 人5型腺病毒rAd-A由本实验室制备保存。 1．2主要材料与试剂 M．MLV反转录酶、TransFastTransfection I、XhoI限制性内切酶、EcoR 公司，rTaqDNA聚合酶、Kpn I、Pacl购自Biolab公司，XDNA／EcoRl+HindllIDNAMarker购自MBI公司， 购自QbioGene公司，Pine DNALadder PlasmidMini TT， 100bp Marker购自华美公司，QIAGEN OPTI．MEM和D．MEM培养基购白GIBICO 术有限公司，淋巴细胞分离液购自上海华精高科技有限公司，抗PRRSV阳性血清，PRRSV抗原本实验室 制各，DH5et本实验室保存。 1．3RT-PCR扩增PRRSV的M基因 细胞总RNA。按M．MLV鼠源反转录酶和rTaq 物，AdM 循环参数为：94℃预变性5mira 延伸10rain。取PCR产物进行2％琼脂糖凝胶电泳。