鹅myf6基因的克隆和胚胎期的表达分析.pdfVIP

一2—0——12——,—V——O—L——U—M———E—I—3—,——N—O——．—I——A—N—，I．M。—A——L——B——IO——T——E—C——H—N——O——L—O——G—Y———B．—U—L——L—E—T——I—N—————————————————一31 鹅myf6：基因的克隆及胚胎期的表达分析 邵芳，王星果，杨磊，郁建锋，顾志良‘ 常熟理工学院生物科学与工程系，常熟，215500 引言 肌肉的生长需要成肌细胞的增殖和分化，而此过程受到生肌调节因子(mvo胛nlc regulatory Myf6，它们均属于碱性螺旋一环螺旋(bHLH)转录因子，能与E蛋白家族形成异源二聚 体识别靶DNA，从而激活肌肉生成的相关基因。目前对水禽在肌肉生长发育相关基因方 面的研究还较少，本研究对鹅叼庐基因进行克隆与胚胎期mRNA表达分析，为进一步研 究该基因在鹅肌肉发育中的功能奠定基础。 材料方法 用Triz01分别提取太湖鹅7d、8d和10 myf6基因全长cDNA序列，通过生物信息学分析序列特征并预测其蛋白结构，通过实时荧 光定量PCR检测myf6基[]mRNA在鹅胚胎不同时期的表达量，进而阐明该因子在胚胎期 的表达规律。 结果与讨论 设计特异性引物结合3’RACE和5’RACE技术获得长度为1196 bp全长cDNA序列，包 括60bp的5’UTR，382bp的3’UTR．723 bp的开放阅读框(ORF)共编码240个氨基酸。 其编码区序列与绿头鸭同源性最高，为9862％，其次是红原鸡，为91．77％，与哺乳类同 源性为81％左右，与鱼类同源性较低，为62％一66％。由同源建模发现，鹅myf6蛋白具有明 显的MRF家族特征结构：保守的中央蛋白基序螺旋一环一螺旋结构(图1)。实时荧光定 量PCR分析表明，鹅胚胎期myf6基因mRNA在第7天就有少量的表达，7天以后表达量逐 渐上升，在18天表达量达到高峰后下降，逐渐趋于平稳(图2)。 …¨‰∞Ⅲ北m ■∞《=}目Ⅷ∞=。 M!耋。 ． II工●I 工■■ ●l_．■■■■■■ ■■■■■ ● I ∥￡ 7d8d 10d14dl5d18d21d 25d28d f： 目2*myf6￡目{目自it*#目 ＆：B№￡i}自(E7，E8，E10)#Ⅻ”i*十Ⅱ* 十mym目^t；*∞￡f十em(E14E15．E18E21E25．E28 挂Ⅻ*{n^n女十mvm日^4 三维结构很大程度上决定了蛋白质的功能。鹅myf6蛋白具有HLH(99．150)结构， G州TG，从而活化肌肉特异性蛋白的表达。生肌调节园子的bHLH结构具有同源性， 但它们在胚胎中骨髂肌分化时所起的调节作用却不同。Myf6位于其他生肌因子的下游， 主要参与肌管的终端分化，在肌纤维的形成和肌肉表型的维持中起作用。通过实时荧光 定量PCR发现，myf6．基因的表达规律与肌纤维形成过程在时间上基本吻合。此外对鹅另 ～个生肌田子myoD基因表达量也做了检测，发现myoD整体表达趋势和myf6相似，但在 胚胎期myoD mRNA的表达水平明显高于myf6基因，这也从一个方面说明myf6基因和其 他几个生肌调节因子共同调控肌肉的发生和发育过程。 关键词：鹅；myf6：RACE：组织表达分析 致谢：本研究由江苏省“六大人才高峰”第穴批农业项目资助。 GOre }通讯作者，E-mai)?z】】