有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共3页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
病毒及病毒病害
v-GAV运动蛋白的表达、纯化、
抗血清制备与检测
谢家建，王锡锋，刘艳，彭于发，周广和
(中国农业科学院植物保护研究所植物病虫专生物学国家重点实验室， 北ft．100094)
运动蛋白(MP)是病毒基因编码的，介导病毒在宿主细胞间运动非常重要的蛋白。对MP蛋白定量和
在植株体内进行跟踪研究是研究其功能的重要基础。而MP蛋白在发病植株体内含量很低，很难得获得纯
化的MP蛋白。本研究将BYDV-GAV
蛋白，采用Ni柱进行亲和纯化，获得纯化的MP融合蛋白。免疫小鼠制备了抗MP血清。抗血清效价为l：
10000，并在接种发病植株中检测到MP蛋白，其含量为0．5．1岖胞鲜重叶片。
1 MP基因的克隆和表达载体的构建
(下划线为NdeI 和 MP2：
5-GA!坠蟹幽三GCCa认GGAGAGCAAGG．3‘ 酶切位点)
kDa，表达的融合蛋白是在完整的MP
的MP基因全长为462bp，编码154个氨基酸，理论分子量为17．2
子量为19．7kDa。
2 MP融合蛋白的表达和纯化
分别接种鉴定阳性的单菌落于4mL的含100
extract，and
1．0％NaCl，pH7．O)中。37℃培养8．12
达带，而空载体和未诱导的阳性克隆则没有(Fig．1)，将表达量高的单菌落用于大量表达。
1L含100 mM的IPTG
I．tg／mL氨卞的LB液体培养基中。37℃培养使OD600达到约0．6时，加入至终浓度0．4
Buffer
进行诱导，28℃诱导8hr。培养菌液12000 A(50raMsodium
rpm离心20min，沉淀用50mL phosphate
buffer
pH7．4，500mMNaCI)悬浮。采用超声波破碎菌体，进行溶解性分析，结果表明表达的可溶性MP蛋
用于表达蛋白的纯化。
大量纯化时采用3种不同的溶液进行纯化，先分别采用不含咪唑和含lOOmM咪唑的BufferA洗脱杂
．．215．．
蛋h川信500mM的麟I啡沈脱Hn7』蛋亿透析后崔臼浓他删定为f)28
…』、约6 3J
nag的MP·囊引蛋白tFig
计曲档
刊
一州；薹 搿～
罴善耄 ：呈一_萋～一 曲时m 罴州 ofpositive
孵鲰嚣孵龃器
虬虬
M。
l善-
M‘molecular
2 MP如sion cells sonication．Lane wet曲t
文档评论（0）