肾炎防衰液对5%2f6肾切肾纤维化大鼠作用机制的实验的研究.pdf

肾炎防衰液对5／6肾切肾纤维化大鼠作用机制的实验研究 王颖航导师王耀献长春中医药大学第一附属医院 我们在临床上用肾炎防衰液治疗慢肾衰，通过60例临床观察证实该方对慢肾衰具有明显疗效，可以改善肾功能 和症状，降低24h尿蛋白等指标。将该方应用于UUO大鼠。肾间质纤维化的防治，取得了肯定的疗效。在以上研究基 础上进一步研究肾炎防衰液对5／6肾切肾纤维化的防治作用。在本实验中，采用5／6肾切肾纤维化模型，通过观察肾 炎防衰液对5／6肾切肾纤维化大鼠24h蛋白尿、血BUN、SCr及肾组织病理改变等，研究其对慢肾衰的防治作用。 1．实验材料 1．1实验动物与分组 纯系sD大鼠(购自北京维通利华动物实验中心)，雄性，体重180．2009，适应性喂养1周，测体重、尿蛋白阴性 后，随机分为正常组9只，假手术组8只，模型组8只，苯钠普利组8只，肾炎防衰液大、中、小各8只。实验期间自 由饮水和进食。 1．2实验药物 肾炎防衰液(以下简称SYFSⅥ，由北京中医药大学中药学院提供。盐酸苯那普利，购自北京诺华制药有限公司， 批号05048。尿毒清。购于广州康臣药业有限公司有限公司，批号200411130 2．实验方法 2．1模型制作 造模方法采用分次5／6肾切除。大鼠取俯卧位，背部手术野区域备皮，消毒、麻醉。距左脊肋骨1．5cm处作长约 2cm的斜切口，分离皮下组织及肌肉，暴露左侧肾脏。分离肾周脂肪囊及肾蒂(注意勿损伤肾上腺)血管夹夹闭肾蒂， 用眼科弯剪分别在左肾上下极弧形切除2／3肾脏组织(主要为皮质部分)。压迫创口约3min，松开血管夹，观察无活动 性出血后复位残肾。逐层缝合肌肉、皮肤。假手术组，仅从背部切开皮肤和肌肉，挤出肾脏，不切除，随即放回， 缝合后正常饲养，不做处理。1周后行二次手术切除右肾。 2．2实验动物的分组和给药方法 术后随机分组：肾炎防衰液大、中、小剂量组各8只。模型组8只，苯钠普利组8只，尿毒清组8只。术后两周开 西药对照组给予苯那普利1．Omg／kg体重，中药对照组给予尿毒清259／kg体重，正常组、模型组和假手术组每日给予 等容积生理盐水灌胃。 2．3标本的收集 于造模后第17周末收集24h尿液，处死前[d／it入代谢笼，禁食不禁水，分离颈动脉取血，分离血清，待测生化 指标：取肾脏，固定、石蜡包埋、切片，进行免疫组织化学测定和原位杂交组织化学指标等测定。 2．4指标的检测 2．4．1血、尿生化指标测定：(1)24d,时蛋白定量：将大鼠置入代谢笼内分别于0周，术后4周，8周，12周，15 尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)于造模后第17周末处死分离颈动脉取血，分离血清，采用7150型全自动生化分析仪测 定。 2．4．2肾组织病理学检查 将所取的部分肾用10％中性福尔马林固定过夜，一周后进行石蜡包埋、切片，切片厚度为4ttm。行HE染色、 Mallory染色、Masson染色及六胺银染色， 2．5统计方法 1．0软件进行统计分析，所有实验数据采用x土SD表示，求平均数，A．NOVA单因素方差分析，LSD 采用SPSSl 法作两两比较。P0．05认为组间有差异，P0．01认为组间有显著性差异。 3．结果 3．1大鼠24dx时尿蛋白情况 造模第1w，4w，8w，12w，[5w大鼠的24h尿蛋白，统计学分析表明： 造模不同时间点大鼠24h尿蛋白呈增加的趋势：模型组和治疗组24h尿蛋白增加比较差异显著(P0．01)；而治疗组 573 A 《汐第21次中华中医药学会肾病分会学术会议论文汇编 中肾大组和洛汀新组较其他治疗组比较24h尿蛋白增加相对不显著。 图(略) 3．2大鼠血清生化变化情况 与正常组比较，模型组大鼠血清中BuN，C晗量呈显著增高的趋势(Po．01)；与模型组比较。洛汀新治疗组， 降(PO．05)；与洛汀新阳性药物组比较，SYFSY备剂量治疗组大鼠血清BUN，cr含量没有显著差异(Po．05)． 3．3肾组织石蜡切片HE染色结果 正常大鼠肾组织着色均匀，肾小体结构完整，肾细胞染色均匀，细胞核大而圆多居于细胞中央：造模15w大鼠 肾脏可见肾小球的细胞增生，可见中性多形核和嗜酸粒细胞浸润．肾小管上皮细胞可见颗粒变性和滴状变性，肾间 质水肿和炎性细胞浸润。