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110 中田癌症研究进展。 土槿皮甲酸明显抑制新生血管生成 萧东蒋建飞袁胜涛丁健 目前认为，原发肿瘤的生长和转移都依赖于来源于既存血管的新生血管的生成(angiogen- esis)，肿瘤组织的新生血管的生成能力与恶性肿瘤的生长速率、侵袭、转移程度呈正相关。近 几年来已发现许多血管形成的生长因子和抑制因子，肿瘤的血管系统已成为一个崭新的、有希 望的抗肿瘤治疗靶点。人们已致力于研究和开发能抑制或破坏血管生长，有效阻止肿瘤的生 长和转移的药物，这类药物称为肿瘤血管生成抑制剂(tulmorangiogenesis acidA，PAA)是我国科学家首次从中草药土槿皮中分离得到的有效成 土槿皮甲酸(pseudolaric 分之一，分子量为330．结构式如图1。PAA具有抗早孕、抗真菌作用，并对多种人肿瘤细胞有 有明显的新生血管生成抑制作用，因此对其作了深入的研究，以探讨PAA抗肿瘤的可能机制。 o 田lPAA的化学结构 材料与方法 1．药物PAA由中国科学院上海药物研究所药物化学研究室白东鲁研究员提供，bFGF 为珠海东大生物制药有限公司产品。 Cmlture 2．细胞培养ECV304人脐静脉内皮细胞株购自AmericanType Collection。细胞 时进行实验。 本课题受国家重大基础研究规划(973)基金项目资助(G1998051104) 作者单位：200031上海，中国科学院上海药物研究所 土槿皮甲酸明显抑制新生血管生成 111 wall)置人96孔板，24 (cI|rcI∞咄Cur)；以溶媒作对照。再培养48 h后加入MTT，处理后经酶标仪测定570nm处的 光吸收值(A570)。 抑制率=幽迪箍纛产×1000,6 4．细胞迁移试验L4J 板，37℃培养24 h。然后，在显微镜下轻轻刮去一半，并完全清除，分别换上内含PAA、Cur或 溶媒的培养液，以bFGFlO ng／ml刺激细胞迁移。再于37℃培养24h。在相差显微镜下观 察，计算迁移面积。 ． Tnl Science 加入到transwdl(Coming 液，分别内含PAA、Cur或溶媒对照；以bFGFl0 ng／ml刺激血管生长，37℃培养24h。然后， 在相差显微镜下观察，随机选择5个视野计算血管形成的长度(×200)，得出药物抑制率。 6．鸡胚尿囊膜血管生成试验【6J将4日龄鸡胚置人lOInrn平皿，内含10％胎牛血清的 绵块。鸡胚放入O。2孵箱孵育48h后，在解剖显微镜(LEIcA 录结果。评价标准为：(一)即覆盖区域血管生长正常或无血管区域4Ⅻ；(+)无血管区域 为4～6mm；(+十)无血管区域6mm。 mmol／L mmol／L U Tfis-HCI(pI-18，3)，1．5MgCl2，50 KCI，50／anol／LdNTPs，3TaqdNA聚合 s，60℃复性40 酶，0．2坤d／L特异性引物]中经33个循环扩增(94℃变性30 s，72℃延伸40s)。 PCR引物如下：VEGF，5-GAGTGTGTG 7． CrcCl、GCOCGGcTcACcGOcrCGG AACCC