2012 国家创新实验申请书.docVIP

项目编号＿＿＿＿＿ 石 河 子 大 学 国家大学生创新创业训练计划项目 申 请 表项目名称项目项目负责人 学院、年级、专业联系电话 电子邮件1518099142@ 填表日2012.03.20 ? 石河子大学教务处制表 ??填表说明 ???项目名称 微生物法制备番茄皮渣膳食纤维高产菌株的筛选及分子生物学鉴定 申请经费 1 万元 起止时间 2012年 月至 201 年 月 负责人 1518099142@ 参加成员@ 姚秋宇 2010511132 食品学院； 轻工纺织食品类1551480714@ 孟春棉 2010511094 食品学院； 轻工纺织食品类1565169960@ 指导教师 姓名 职务/职称 所在学院及研究方向 联系电话 E-mail 朱丽莉 副教授 食品学院； 粮油加工 1331993 7756 844591836@ 王庆玲 讲师 食品学院； 食品安全检测 1339993 5425 qingling810629@ 一、项目申请理由”，结果表明番茄果皮的膳食纤维含量为69.79%，认为番茄皮渣是开发高钙型膳食纤维的潜在原料。刘绍鹏、林文庭等进行了番茄膳食纤维提取工艺的研究。郑刚等研究了不同制备工艺对番茄皮渣膳食纤维理化性质的影响，结果表明酸碱结合法和碱法制备的膳食纤维具有较高的膨胀力和持水力，酶—酸法及酸法工艺制备的膳食纤维具有较高的持油力。刘绍鹏等研究了水溶性番茄纤维对糖尿病小鼠的降血糖作用，认为水溶性番茄膳食纤维降糖作用强于番茄粗纤维，有较好的辅助降糖作用。 国外在谷物膳食纤维如小麦麸皮等研究领域有大量文献，但关于番茄膳食纤维研究的文献较少，且主要集中在营养学方面. P.Bobek等人在大鼠的膳食中添加5%的干燥番茄皮渣，发现番茄皮渣的加入可以显著降低肝脏以及心脏的胆固醇水平，并能减少血浆中共轭二烯的含量和红血球中抗氧化酶如过氧化氢酶和谷胱甘肽酶的活性。Alvarado等人研究了番茄膳食纤维对小鼠血糖、血脂的影响，认为番茄膳食纤维可以使小鼠就餐前后血。Donata Iandolo等人以番茄皮渣为原料利用固态发酵法（SSF）培养真菌Pleurotus ostreatus和Trametes versicolor，并 二、项目研究内容（）-2、10-3、10-4、10-5、10-6的土壤稀释液。用筛选培养基制成 平板，然后用移液管分别取0.1mL 10-4、10-5、10-6的土壤稀释液涂于相应编号的平板上。涂好后，将平板倒置于30℃恒温培养箱中培养。挑选出其中透明圈大的菌落，每个单菌落划线培养五代，得到纯化菌株。 2.摇瓶培养实验： 将复筛得到的菌接种于斜面培养基上，28℃培养4d，用灭菌的接种环将孢子刮下，加入到预先灭菌的装有30mL无菌盐水和玻璃珠的锥形瓶中，制成单孢子悬液，用灭菌的生理盐水调整其孢子数量为106个/mL，吸取200μL接种于含100mL种子培养基的250mL摇瓶中，振荡培养2天后，将其以10%接种量接种于发酵培养基内，在30℃，120r/min的摇床内培养6天后，分别收集发酵液待用。 3.筛选菌株发酵液膳食纤维含量的测定 3.1不溶性膳食纤维的测定 取50mL筛选菌株的发酵液，在60℃烘箱中烘干到恒重，称重为M，再称取1.00g干燥的发酵样品,放置在平底烧瓶中，经过沸水浴糊化后，用淀粉酶、糖化酶酶解并过滤，加入到100mL中性洗涤剂溶液，再加入0.5g无水Na2SO3,加热，5~10分钟，煮沸腾后，移至电热板上，保持其微费1h,转耐酸的玻璃砂芯漏斗（恒重质量m1）中抽率至干，110℃维持4h，取 出样品在置于干燥器中冷至温室，称重为m2。则不溶性膳食纤维含量为： X1=[(m2-m1)/1]×M/0.5 3.2可溶性膳食纤维的测定测定（参考AACC32-06） 3.3总膳食纤维含量的测定 总膳食纤维含量=不溶性膳食纤维含量+可溶性膳食纤维含量 （二）菌株的鉴定 1.菌落的形态观察： 采用“点植法”将菌种接到PDA平板上，28℃培养、连续几天观察菌落边缘和表面的质地、颜色、气味等形态变化。 参考文献用扦片法，在光学显微镜下观察菌丝、分生抱子梗和抱子等形态并照相。 2.菌种的分子生物学鉴定： 将待测菌种接种于混合液体土豆培养基，28℃，170r/min条件下培养，3d后收集菌体。参考文献方法利用震荡法提取总DNA，选用真菌保守序列通用引物：PITS1和PITS4引物对，进行PCR扩增。 PCR产物用1%琼脂糖凝胶在电压180v、电流250mA下进行电泳。电泳结束后在紫外观测仪中观察电泳结果，并拍照。