齿爪鳃金龟属4个种群分类地位的RAPD分析.pdfVIP

昆虫区系分类 45 齿爪鳃金龟属4个种群分类地位的RAPD分析’ 顾 耘 王思芳 (莱阳农学院植保系， 山东莱阳，265200) 摘要作者应用11API)技术，对华北大黑鳃盎龟Holotrichiaoblim(Faldernmrm) 的支登和南京种群、东北大黑鳃叠龟(日．如删，枷缸Bate8)和矮臀鳃叠龟H．ernesti Reitter进行了好类地位的研究。矸究结果表明．四个类群问的平均遗传距离分别为： 华北大黑的两个种群闻为0．373，文登种群与东北大黑间为0．4t1，南京种群与东北 爆陴为0．424，矮臀蝇垒龟与文登种群、南京种群和东北大黑问分别为0．699q 。皿7t1和0．692b当采用不同教量的引物进行UPGMA聚类时，采用20条或更多数量 的引袖时，聚燕结果相同，少干20索则聚类结果出现变化。目此，当进行种下_f}卜元 分类研究时，当采用20条引物为宜。簪台各种研究指标，冻北大黑与华北大黑的再 十种群的平均遗传距离为种群水平的变化，由此可以得出：东北大黑与华北大黑属 同缺昆虫，接厢动物命名法规，东北大黑是华北大黑的同物异名∥． 关键词RAPD齿爪姆盎龟聚类分析 Bates，1888)和分布 在我国，分布于东北各地的东北大黑鳃金龟(踟k成^缸．d／ompha／／a 外，它们在幼虫形态、发生规律、行为习性，甚至它们的大小年现象(因两年发生一代，从 而出现一年为成虫发生年，捷年则为幼虫发生年的现象)也相一致。长期以来，这两种金龟 甲的分类地位一直困扰着分类学者。作者拟运用分子系统学的方法，采用随机扩增的多态位 DNA技术(RAPD)，对华北大黑鳃金龟的南京种群和胶东种群、东北大黑鳃金龟，以及这两 种金龟甲的姐妹种矮臀鳃金龟(H．ernesti Reitter)等4个类群的金龟甲进行研究，以确定其分 类地位。 1材料与方法 1．1供试虫熏 本研究所用材料均为越冬出蜇后的成虫。华北大黑鳃金龟南京种群(NJl—5)采自南京 市卫岗，股东种群(WDl—5)采自威海市文登小观，东北大黑鳃金龟(DBl～5)采自沈阳市 东陵，矮臀鳃金龟(ATl～5)采集地点与东北太黑相同。 ·本硬目得到了山东省自拣科学基盘委员会的资助。 走向2l世纪的中国昆虫学 1．2供试引物和试剂 大连宝生物公司生产的DL2000。 1．3基因组DNA的提取 基因组DNA的提取参照J．Sambrook和李永明的方法。将单头活体成虫的生殖腺(雌虫为 去除卵粒的卵巢，雄虫为睾丸)取下，放于组织破碎器中，加400ral提取缓冲液(1％SDS， NaCl，25mmoltlEDTA)，研磨10次。将研磨液移人I．5ml 50mmdtlIris—C1，pH8．0，25mnml／l 离心管中，加100ra缓冲液冲洗破碎器也移入离心管中。每管中加8．uL巯基乙醇、1．5脚蛋白 10mln，收集上清液。重复以上过程，直至无蛋白质为止。加人0．1体积的2．5MNaCI，2倍体 1E(10nunol[1 8．O)，一20℃保存。 Tris—HCI，pH7．4，1mmol／LEDTA，pH ‘ 1．4 DNA扩增 X缓冲液，2mmolllMgcl2+模板lpl． 总体积为259l，内含dNTP各150,um01]l，l单位Taq酶，10 用重蒸水加至25出，再加入25础石蜡油。扩增在DNA扩增仪上进行，反应程序为：94℃变性 4℃。 1．5电泳 胶板在溴化乙锭中染色后，在紫外灯下观察、照相。 I．6结果计算 数，Ⅳ。：目个体的带数，M。：A和B两个个体的共享带数。用P=l一日为距离指数进行分 究的基因座个数，吐j，6．分别为第，个基因在群体A和且中出现的频率。分别计算出4个类 群