高效液相色谱微透析取样测定活鼠脑组织液中微量神经递质.pdfVIP

——一生堑些芏塑生塾皇垫些 高效液相色谱微透析取样测定活鼠脑组织液中微量神经递质‘ 常理文徐桂芸韩慧婉 (中国科学院化学研究所分子科学中心北京100080) 关键词神经递质微透析脉冲安培检测 单胺类神经递质主要包括去甲肾上腺素(Norepinephrine E1、 NE)、肾上腺素(EpirIephrine 多巴胺(Dopamine DA)和5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine5．HD等，是哺乳动物神经 hydrodiodde 的重要信息传递物质。检测脑组织和体液中单胺类神经递质对研究神经疾病的发病机理和神经生 理现象有重要意义11l。测定生物样品中单胺类神经递质，常用的方法是高效液相色谱．安培检测 泛用于脑组织哪、血浆I·l和尿液哪样品的分析。对活体脑组织液中神经递质研究尚不多161。本工作 采用高效液相色谱分离啦R冲安培检测．对单胺类神经递质的分离和检测条件进行了研究，在此 基础上考察了脑微透析液样品的回收率。应用国内建立的微量取样技术％对从活鼠脑组织动态 微透析取样的样品进行了测定，获得初步结果。 1实验部分 高效液相色谱仪由下列单元组成：635A高压液相色谱泵(日本岛津)．PADII型脉冲安培检 x 测器(美国Dionex．4奎司)，Zorbax mm250 5灿1clg色谱柱，4．6 ITlm(美国HewlettPackard)，色 谱工作站(北京康志电子技术研究所产品)。流动相为16％的甲醇水溶液含40mmol／L乙酸钠， 15 ltlmoIlL mmol几柠檬酸，0．25tnmoUL庚烷基磺酸钠和0．2EDTA-钠盐。pH=4．52：淋洗液经 脱气处理。流速为1mL／min，样品体积为20皿， 2结果与讨论 2．1色谱分离 单胺递质的HPLC通常用离子对c，。反相色谱柱分离。反相离子与在酸性介质中质子化的单胺 递质生成离子对配合物。本文采用庚烷基磺酸钠为离子对试剂。我们考察了离子对试剂浓度，淋 7．94和13．07，使分析周期很长。离子对试剂浓度降至025mmo儿，甲醇含量为16％，pH增至4．62 使6种单胺类神经递质以及代谢物在16rain内达到完全分离。建立了3，4-二羟基苄胺为内标的定量 000}．tgtL浓度范围内呈良好的线性，其相关系数在0．999～0．994之间。 方法。在38斗叽～1 2．2回收率测定 在用于微透析的灌流液中加入一定量的NE、E、DA、5-HT和5-H1AA．然后用上述方法进 行测定，重复测定5次，结果如表1。上述回收率结果是在灌流液中加入单胺神经递质后．立即进 样铡定所得，当放置一天后测定．其回收率急剧下降至10％～200,6．说明微量单胺神经递质在弱 碱性溶液中不稳定。因此微透析取样后，应立即进行HPLC分析，或酸化后储存。 ·国家自然科学基金资助项目。 ——————————————————————盟些兰竺生塾量垫些 v。 为了提高检测灵敏度，对工作电极电位，脉冲周期进行优化选择。确定工作电极电位为o．8 其检测极限达到23¨扎。 寰1单胺神经递质的回收率 DA 275 20．1 77+3 5-HT 40．0 39．6 99_--t-4 5-H／AA 75．0 75．7 1n1+1 参考文献 FisherD}