国立成功大学补助专题研究计画成果报告.doc

國立成功大學補助專題研究計畫成果報告 以台灣本土之海洋異營性微細藻類生產n-3多元不飽和脂肪酸 (II) Production of n-3 polyunsaturated fatty acids using Taiwan indigenous marine heterotrophic microalgae (II) 計畫主持人：陳逸民 執行單位：海洋中心，生物科技研究所 中 華 民 國　 98 年 7 月 30 日 (一) 計畫中文摘要。（五百字以內） 台灣海洋中存在許多富含二十碳五烯酸 (EPA) 以及二十二碳六烯酸 (DHA) 之異營性微細藻類，過去未能評估其是否具有商業價值。因此本研究的目的即在開發台灣富含n-3多元不飽和脂肪酸的優質異營性微細藻類品系。 研究期間我們共獲得25個異營性藻株品系。利用18SrDNA的分析以及脂肪酸組成的比對，可將這些藻株分成8群，其中Aurantiochytrium是最具量產DHA潛力的分群。我們以將其中最具潛力的藻株BL10進行培養條件的最適化。在以10L發酵槽進行培養，可在4.5天內由2gL-1的初始培養密度長到57gL-1，細胞內含17.4%的DHA，顯示BL10是一個良好量產DHA的藻株。 關鍵字：異營性微藻、二十二碳六烯酸 (二) 計畫英文摘要。（五百字以內） Some of the EPA or DHA-rich marine heterotrophic algae have been found in Taiwan; however, there are still lacking detail analysis, characterization of these indigenous algae and developed for commercial application. Hence, the purpose of this study is to screen for Taiwan indigenous EPA or DHA-rich heterotrophic microalgae. 25 heterotrophic algal strains have been isolated from various marine habitats of Taiwan. They can be separated into 8 monophylogenic groups according to their 18SrDNA sequences and fatty acid profiles. An Aurantiochytrium strain BL10 with high DHA production was subsequently chosen for further manipulation. Under optimal conditions using 10 L fermenter, it could grow form 2 g to 57 gL-1 in 4.5 day, with dry biomass containing 17.4% DHA, demonstrating BL10 as an excellent source of microbial DHA. Keywords: heterotrophic microalgae, DHA 一、工作項目 (1) 本土異營性微藻品系的純化、保存與鑑定與脂肪酸組成分析 (2) BL10的量產條件分析 二、結果 (1) 本土異營性微藻品系的純化、保存與鑑定與脂肪酸組成分析 我們一共由台灣各地取得25株的異營藻。採樣的地點及棲地如表一所示。 後續進行藻株18SrDNA的分析，在獲得其18SrDNA序列後，將所有藻株的資料，連同一些NCBI genebank內近似藻種的資料，一同進行親緣關係分析的結果如圖一所示。由此可將這些藻株分成八群，其中有五群為Thraustochytrium spp.，另三群分別屬於Aurantiochytirum、Aplanochytrium、以及Oblongichytrium。 將各個分群中任取一個藻株，放在H medium (yeast extract/monosodium glutamate/glucose = 0.2/0.5/2 gL-1 in seawater) 內培養後，所得到的型態特徵如表二所示。這些型態特徵可進一步的驗證18SrDNA的鑑定結果。 藻株脂肪酸的形式如圖二所示。由高度多元不飽和脂肪酸在總脂肪酸中的的比例、n-3/n-6 C22:5 (DPA) 的相對量、以及C20:3n-6或C20:4n-6的有無，可將這些藻株的脂