抗阿维菌灭小菜蛾酯酶等位酶研究.pdfVIP

药弃J毒理 379 抗阿维菌灭小菜蛾酯酶等位酶的研究。 李瑾乔传令“ (中国科学科学院动物研究所，虫鼠害综合治理国家重点实验室，北京 100080) 摘要本文应用生物测定和淀粉凝胺电竦研究了抗阿维菌素灭小菜蛾种群酯 酶等位酶多态性。生物测定结果表噶：实验种群对阿维菌素抗性为2．23倍。在取样 种群中存在高活性的a和B酯酶(EST)，其电竦迁移率与致倦库蚊实验参考系均不 同。阿维茵来结果分析表明，该种群个体基固型正在向纯合基因型过渡。 关麓词 抗阿维菌素小菜蛾 酯啐等位酶 多态性 本文运用生物铡定分析抗阿维菌素小菜蛾种群的抗性水平，进一步用淀粉凝胶电泳的方 法着重分析酯酶等位酶的多态性，从而试图解释小菜蛾抗性发生发展的进化规律。 I材料与方法 I．1材料 I．1．1供试小菜蛾 云南种群由高希武教授提供，分别随机采自菜地。用阿维菌素逐代培养抗性，培养12 代。 致倦库蚊，Selax系，酯酶以，雎的标准品系，来源于美国加州野外有机磷抗性致倦库蚊 种群，系法国科学院科学与进化研究所Raymond惠赠，液氮速冻后，在一70℃冰箱中保存备 用。 I．I．2供试药品 教授提供，水解淀粉(starch hydrolyzed)，法国科学院科学与进化研究所产品，固蓝RR双盐 Fluka公司产品，a一乙酸奈酯及B一乙酸奈酯均为分析纯。 1．2方法 1．2．1生物测定 按照FAO法，选小菜蛾3龄幼虫，用c02麻醉，将配制的系列浓度的杀虫剂丙酮液以 0．43,ul量点滴在幼虫的胸部背板上，并设有丙酮对照，24h检查死亡。用Probit软件系统统计 LD。和95％的可信限等。 。：暑赢器喜≥关项目‘96一∞5一01—08—02L虫鼠害综台治理研究国家重点宴验室创新谭题托2帅47L 380 走向2l世纪的中国昆虫学 1．2．2淀粉凝胶电泳 0．1 kith． Inol，l’Malic 参照Pesteur等的方法进行。采用％s—Mslate—EDTA缓冲液(Tris 0．Olmol／l 0．Ol tool／!，EDTA moV])。选单个小菜蛾3龄幼虫作为每个样品， hydride0．1 M＆ch 加7(1双蒸水磨研上样，电泳于0—40C的冰箱中进行，稳压在200V，4—6h。酯酶的染色： 40ml磷酸一缓冲液，2ml 2％的a一乙酸奈酯，2ml2％B一乙酸奈酯，先在烧杯中混匀后到人染 色盒内，室温下置于播床上6min，然后加入固蓝RR盐tOOmg，继续摇动至酯酶条带清晰后。 立即加5％醋酸固定，12h后加脱水液(醋酸：甘油：水=1：1：3)．29h后用玻璃纸覆盖于胶的 两面，固定在玻璃板上使其阴干，保存。 1．2．3酯酶位点的确定和谱带的分析 酶位点的确定是等位酶分析中最关键的一步。本文在确定酶位点时根据酶谱表现型的遗 传原理，结合个体的倍性和每种蛋白的亚基数进行分析。在淀粉电泳中，当等量的a一乙酸 萘酯(a—NA)和8一乙酸萘酯(P—NA)存在时，酯酶a优先承解a—NA显紫色，醣酶口 优先水解口一NA显蓝色。酶位点确定后，再根据每个位点的谱带确定其基因型。而对于每个 位点的不同等位基因，则按从阴极到阳板的次序依次用1，2，…表示。 2结果 2．1抗药性水平 裹1抗灭小綦■幼虫与对照种群的抗药性比较 Chi2 RR 杀虫舸 种群【D’D(M，虫)(哺)同ope(sE) 2．2云南小菜峨种群醇酶图谱 以Selax作为酯酶剃胆标准，用淀粉凝胶电泳铡得云南小菜蛾的酯酶类型。发现种群中 存在不同于标准系的酯酶，且活性较高。在使用杀虫药剂逐代选择以后，其等位基因在逐步 趋向于纯台。 3讨论 酯酶是昆虫体内的一种重要的解毒酶，