一种新的无传染性的检测HBeAg抗HBe的单克隆酶联免疫吸附法....pdfVIP

维普资讯 第 7卷 第 1期 翕 毒 学 报 Vo1．7 No．1 l 9 9 1 年8月 CHINESE 10URNAL 0F VIROL0GY March l00I 一 种新的无传染性的检测HBeAg抗HBe的单克隆酶联 免疫吸附法 (MonoLISA)的建立与应用 詹美云 苏丽娅 张戈英 田瑞光 汤少华 张满仓 划崇柏 (中国预防医学科学院病毒学研究所，北京) 摄善 应用我室 自1988年5月 以来建立的抗 乙型肝炎e抗原两个抗原决定簇的单克隆抗体 ，和在 大肠杆菌中高效表达的乙型肝炎病毒e抗原 ．组装成检测HBeAg／抗HBe的酶联免疫试剂 (简称Mo— noLISA)。测定了该试剂的特异性，敏感性和可重复性，并与用 日本单克隆抗体和血清e抗原组 装的类似的EIA试剂进行了比较。结果两种试剂捡涮92份乙肝病人血清e抗原和38份血请e抗体 的 总符合率，分别为97．8和和100和。用两种试剂同时滴定一份已知HBeAg阳性和一份抗-HBe阳性 的血清，证明两者的敏感性无显著差异。重复性试验证实，该试剂的重复率为100和。由此证明 ， 用抗-HBeMcAb和基因工程抗原组装的诊断试剂，特异性强，敏感性高，可重复性好，且无传染 性 这不仅为诊断试剂原材料的更新提供 了丰富的来豫，而且将该类试剂提高到一个新水平。 关键锄 抗HBeAg单克隆抗体 单克隆酶联免疫嗳附法 乙型肝炎e抗原／抗一HBe抗体 检测乙型肝炎e抗原和e抗体，对乙型肝炎的诊断和愈后的判断具有重要意义。e抗原是 乙 型肝炎传染性的重要指标。因此，建立特异性强、敏感性高、无抟染性的检测HBeAg／抗HBe 的试剂，具有重要意义 。 1982年 日本 [)首次报道建立了分泌抗一HBe抗体 的杂交瘤细胞系，随后英国 (1984)[2)、 美国 (1986)[3]和我国302医院 (1988)[4)等先后报道建立了分泌抗一HBe的杂交瘤细胞 系。 但这些细胞系分泌的单克隆抗体常因配对不好、滴度低或不稳定等原因，不能组 装 成 检 测 HBeAg／抗HBe的试剂。或者只能与多克隆抗体配对使用，影响了试剂 的质和量。英国和 日 本的单克隆抗体 [5，6)虽然可以代替多克隆抗体，但需进 口，很难满足国内需要。我室 自l988 年5月以来，先后建立了l6株分泌 抗体 的杂 交 瘤细胞系盯，8)，又在大肠杆菌中成功地 表达 了HBeAgC#J。本文报道利用这两者组装的检测H~Ag／抗HBe的酶联免疫吸附 (MonoLI— SA)试剂的特异性、敏感性和可重复性，并以此试剂与北京医科大学人民医院肝病研 究 所 用 日本单克隆抗体和HBeAg阳陛血清组装的检测HBeAg／抗HBe的EIA试 剂相 比较 的结 果 。 材料与方法 (一 )抗乙型肝炎e抗原单克睫抗体 (McAb) 本室制备盯·8)。用于包被或标记的McAb都来 自小 鼠 腹水，都是／b~IgG免疫球蛋 白，其ELISA}~度都在lO万以上。 (二)基因工程衰选的HBe^g本室制蕾 有两种，一种含有高滴度的核心抗原[。)，一种不含或含艰 ·奉课题商国家 七五 》攻关课题 内容 崆稿 日期#lg00年4月9日，同年5月713修回9 维普资讯 病 毒 学 报 7卷 低滴度 的核心抗原(I。]。使甩对前者几平含等量核心抗原，．雨后者则不含核心抗原。 (三)MeAb的纯化 基本按ReikL M尊报遭的二步盐忻法[11]。纯化后抗体清度在l0万以上 ，蛋 白 含量约6~9mg／ml，用于包被和标酶 包被时甩0．5～1Fg蛋8／孔 ／io0~l。 (四)一辟记抗一lib，McAb 甩壕晨吐氧-5_由晦 (筵量Sig皿a产品)按常规过碘酸钠珐标记 ，标 记 后的使用