从顽拗植物荔枝中提取基因组DA技术的研究Nt建业学艺.pdfVIP

： 从顽拗 植物荔枝 中提取基 因 组 DNA技术 的研 究 2、 丁晓查 黾 ／。／ t一福建农业太学园艺系r镉 —j； ：东北i 学园艺系 哈尔慎 1 )一 摘 要 针对荔技体 内吉有大量影响 ⅡNA提取质量的多酚等嵌生代谢物质的特点，在常规瞄 和 cT^B提取 方法的基础 上傲了技术改进，即在棱裂解之前先破碎细胞 ，将存在于细胞质 中的次生物质 除击后再裂解细胞 核，同时加^活性嵌 吸尉杂质 ，反复清洗几次后加^棱裂解液释放蓦因组 DNA，纯化之后经外观和 电泳检测 ， 及 D撕 和 蛳 ，比值的掇j定 限制性内切酶反应，PCR扩增的结果表明，用改进方法提取 的DNA无论在纯度 上j丕是在完整性上都比用常规方法要好 ，用改进的 CTAB法虽然所得的 DNA在产量上要少 ，但质量比其它方法 更好 图2表 I参 7 关键词 掣 盎豇；咚 立莹 7：7一 l『j一 ： CLC 99432 $667．1D1 STUDY oN GEN0 、皿C DNlA EXTRACTIoN FRoM RECALCITRANT U ra|Ⅱ DING Xiaodong ，‘ ＆ LU lJuxin (。脚 。 offtorti,ulnue，F ,A．gr／~tuna／I ，Fuzhou 350Oo2) 吣 州 Hortiadture，,％rttu~a如 Urd,a~ ，Harbin 150030) Abstract Based0ntheirdlue~ceofp0l；ghenolsinlitchi0Ilextractionquantityofger10II．icDNA，anefficient procedurevgastier,elopedforDNAextractionfromlitchl ,noddingthe nalSDSandCTABmethods．The m~jorimprgveraemincludedcollectionofnucleibeforeextractingDNAandaddingaetivatedchltr42~ tobindthe secondarycompoundswhichwe txeGfiedwithDNA Afternucleiwashedforseve s．extracficaasolution w错 added协 ad m舢 cBNA．11坼 resultsfn】m elech雌 Ⅱes ，mliosd D0乩h皿 arid D2帅皿『，ai~ io,, mstricd0nen,donuclease~aridI：CR amplificationsuggestedthatthemodifiedmethods， ial tI|emodred CTABm劬 0d uoehigI-qua~,DNAe叨pamdwithconventionalmethods．Hg2，Tab1，R 7 KE r由 lltchi；DNA extractic*t；modifiedmethod CLC 0943．2 ： $667．101 荔枝(如 惴 So,m．)属于无患子科 S‘padinaceae)，其组织细胞 中台有大量 的多酚、多糖及其它趺生 代谢产物 ，如果采用常规方法分离出来的DNA由于多酚被氧化 ，使样品呈现棕褐色 ，DNA溶液粘稠 ．D确 ／ Dz80岫值降至 1．2～142．fq，DNA不能被内切酶所酶切 ，也不能作为PcR模板 ，进一步采用各种纯化方法如多 次用酚．氯仿抽提也不能得到所要求质量，并且 DNA因在抽提 中受机械剪切作用而不断被 降解 ．在其它植物 如棉花 、马铃薯 、核桃 、=!艺眼等植物的 IYNA分离工作中也 出现类似的问题 ．所以这类含有大量影响高质