十溴联苯醚与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究.pdfVIP

第 38卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 10期 2010年 l0月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1479～1482 DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01479 十溴联苯醚与牛血清 白蛋 白相互作用的荧光光谱研 究 谢显传 王晓蓉 “ 张幼宽 郑建 中 吴颖欣 薛银刚 (污染控制与资源化研究国家重点实验室，南京大学环境学院 ，南京大学水科学研究中心 ，南京210093) 摘 要 在模拟生理条件下 ，采用荧光光谱法研究十溴联苯醚 (Deca—BDE)与牛血清 白蛋 白(BSA)的相互作 用。结果表明：Deca-BDE对BSA的内源荧光有静态猝灭作用。Deca—BDE与 BSA在277，298和310K的结 合常数分别为 1．92×10，1．97×10 和2．16×10L／mol。Deca．BDE在 BSA接近于色氨酸残基附近有 2个 结合位点。热力学参数表明，Deca—BDE与 BSA相结合的主要驱动力是疏水作用力。与Deca—BDE结合后， BSA色氨酸残基附近肽键伸展程度增加，蛋白分子结构疏松。 关键词 十溴联苯醚；牛血清 白蛋 白；荧光光谱 1 引 言 多溴联苯醚(PBDEs)由于具有阻燃效率高、价格便宜及对材料性能影响小等优点，常被加入树脂、 聚苯乙烯、聚氨酯泡沫等高分子合成材料 中作为阻燃添加剂，在纺织、建材、交通工具和电子等领域广泛 应用 ¨ 。2001年全球 PBDEs产量 已达 6．7万吨，其 中十溴联苯醚 (Decabromodiphenylether，Deca— BDE)占PBDEs总量的8O％以上…。2001年我国十溴联苯醚 (Deca．BDE)的销售量已达 1．35万吨 J。 由于不是以化学键与本体材料结合，PBDEs很容易从产品中释放出来进入环境。 目前全球 PBDEs污染 非常普遍 ，随处可检测出PBDEs，甚至在北极地区也能检测到 J。由于化学结构与多氯联苯 (PCBs)类 似 ，PBDEs的亲脂性强，在环境 中持久稳定，易在生物体 内富集，可通过食物链产生生物放大效应，危害 高营养级的生物 。有研究表明，PBDEs会干扰生物体的甲状腺激素水平 ，影响生物神经系统的正常 发育。此外，PBDEs还表现有肝毒性、肾毒性、生殖毒性及致癌性 ’。 血清白蛋白是动物血浆中最重要的载体蛋 白，是外源污染物在生物体 内迁移的重要载体 。但 是在生物体 内血清白蛋白如何与PBDEs相互作用以及它们如何运载PBDEs还不甚清楚，也未见相关的 研究报道。因此，本实验在模拟生理条件下研究 Deca．BDE与牛血清 白蛋 白(BSA)的相互作用，对了解 Deca．BDE在生物体内的迁移转化、生物致毒机理等具有重要意义。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 F-700型荧光光谱仪 (13本 日立公司)；MilliporeQ超纯水系统。牛血清白蛋白(BSA，Fluka公司)， 十溴联苯醚 (Deca-BDE，Sigma—Aldrich公司)，其它试剂均为国产分析纯。 2．2 实验方法 2．2．1 溶液配制 以0．1mol／L磷酸盐缓冲液 (含 0．1mol／LNaCl，pH=7．4)为溶剂，配制 4．0~mol／LBSA溶液，置于 4cI=冰箱 中保存。以二 甲亚砜 (DMSO)为助溶剂，先溶解十溴联苯醚 (Deca—BDE)，再用上述的0．1mol／L磷酸盐缓冲液配制成 10Ixmol／LDeca．BDE溶液，室温放置。 2．2．2 荧光光谱测定 在 10mL玻璃试管中依次加人 2mL4．0×10 mol／LBSA溶液、1mL不同浓 度 Deca—BDE稀释液和 1mL含不同浓度二 甲亚砜 (DMSO)的磷酸盐缓冲液，混匀。为避免助溶剂的影 响，需保证每试管的反应液中二甲亚砜 (DMSO)含量一致。1cm×1cm荧光 比色皿，荧光扫描的固定 激发波长为 280nm，激发和发射通带均为 5nm，扫描 300～450nm的荧光光谱 。同步荧光光谱扫描测 2010-03—10收稿 ；2010-05-08接受 本文系国家重点基础研究发展计划”973”项 目(No．2009CB421604)资助 E—mail：ekx