头孢哌酮舒巴坦对产AmpCβ内酰胺酶阴沟肠杆菌的抗菌作用比较物等效性研究.pdfVIP

· 672 · 中国药物与临床2011年6月第 11卷第6期ChineseRemedies＆Clinics．June2011,Vo1．11，No．6 头孢哌酮／舒巴坦对产AmpCI3一内酰胺酶 阴沟肠杆菌的抗菌作用比较物等效-性研究 程春梅 郭世彪 本研究对 7个厂家生产的头孢哌酮／舒巴坦进行抗菌作 育 18-24h，观察结果，分别测量纸片的抑菌圈直径。判定标 用比较，给医院制定进药方案及临床选用头孢哌酮，舒巴坦提 准 ：根据表型筛选 ，头孢吡肟、亚胺培南表现为敏感 ，而头孢 供理论依据。 他啶／克拉维酸、头孢噻肟／克拉维酸、头孢噻肟、头孢西丁、氨 1 材料与方法 曲南和头孢他啶表现为耐药 ：或在头孢他啶／克拉维酸、头孢 1．1 材料 噻肟／克拉维酸 、头孢噻肟、氨曲南、头孢他啶的抑菌圈内存在 1．1．1 实验菌株：2010年 1月至6月山西医科大学第二医院 有散在菌落；或亚胺培南表现为敏感 ，而头孢吡肟、头孢他啶／ 临床标本中分离的对青霉素类 ，第一、二代及 1种以上第三 克拉维酸 、头孢噻肟／克拉维酸、头孢噻肟 、头孢西丁、氨曲南 、 代头孢菌素耐药的无重复阴沟肠杆菌30株。 头孢他啶均耐药：或亚胺培南表现为敏感 ，头孢他啶／克拉维 1．1．2 标准菌株 ：产 AmpC31-内酰胺酶 (AmpC酶)阳性质控 酸与头孢吡肟之间有扩大的抑菌圈或头孢噻肟／克拉维酸抑 菌株为高产AmpC13-内酰胺酶的阴沟肠杆菌029M，产AmpC 菌圈直径 比头孢噻肟抑菌圈直径≥5mlYl。判断为存在AmpC B一内酰胺酶的阴性质控菌株为阴沟肠杆菌029。产超广谱p一 酶持续高水平表达，最后2种表型的细菌同时产生AmpC酶 内酰胺酶 (ESBLs)标准菌株K．pneumoniaecF104为山西医科 和ESBLs。(2)确证实验：参照Coudron等[2]推荐及吴伟元等 大学第二医院药敏实验室保存株。 改良的三维试验方法并作了部分改进。①酶粗提物制备：反 1．1．3 质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922为山西医科大学第 复冻融法制备酶粗提物。挑取MH琼脂平皿过夜培养的疑产 二医院药敏实验室保存菌株 。 AmpC酶菌株数个菌落加入 15ml胰酶消化大豆肉汤中．35 1．1．4 仪器与试剂 ：VITEK一2全 自动细菌鉴定与药敏仪及 ℃恒温摇床 200r／min孵育 l2～16h，4000rm／in，4℃离心 30 相应的阴沟肠杆菌鉴定卡为法国梅里埃公司产品。注射用头 min，弃上清液 ，沉淀中加入0．06mol／L磷酸盐缓冲液 (PBS) 孢哌酮舒／巴坦 (A厂，批号 100101：B厂，批号090122005；C (pH7．0)1．5ml，旋涡混匀后，于一80℃和37℃各 30min反 厂 ，批号 090122001；D厂 ，批 号E厂 ，批号 复冻融 6次，10000r／min，4oC离心 30min，将上清液经细菌 F厂，批号0912021；G厂，批号090402)。 过滤器 (孔径为0．22wm)过滤．滤液经MH琼脂平板常规细 1．1．5 药敏纸片及培养基 ：头孢他啶(CAZ，30 g／片)、头孢 菌培养阴性者，即为酶粗提物，置一20℃冻存备用。~Fox三 曲松 (CRO，30 g／片)、头孢噻肟 (CTX，30 g／片)、头孢吡肟 维试验：将 0．5麦氏单位菌液均匀涂布于MH琼脂平皿 ，取一 (FEP，30 g／片)、氨曲南 (ATM，30 g／片)、头孢西丁(FOX，30 30IxgFOX纸片贴于平皿中心，用无菌的自制打孔器，直径5 g／片)、亚胺培南 (IPM，30 片)、头孢他啶+克拉维酸 mm．在距离FOX纸片边缘5mm左右处对称打2孔，用微量 (CD02，30+10 g／片)、头孢噻肟+克拉维酸 (CD03，30+10 加样器在 1