包涵体蛋白体外复性的研究进展.pdfVIP

维普资讯 7卷 6期 生 物 工 程 学 报 V0I 7 № 6 2∞1年 11月 Chinese3。wmd 《Biotechnolo~, Noventber 2∞ 1 包涵体蛋 白体外复性的研究进展 方 敏 黄华糅 中国科学院遗传研究所 ，北京 10010 摘 要 外源基 因在大肠杆菌 中高水平表达时．通常会形成无活性的蛋 白聚集体 即包涵体 。包涵体富含表达 的重 组蛋白，经分离、变性溶解后颁再经过一个台适的复性过程实现童性蛋 白的重折叠，才能够得到生物活性蛋 白 近 年来，发展了许多特异的策略和方法来从包涵体中复性重组蛋白。最近的进展包括固定化复性 及用一些低分子 量 的添加桶等来减少复性过程中蛋白质 的聚集 ，提高}舌性蛋 白的产率。 美t词 重组蛋 白，包涵体 ，重折叠 ，复性 ，二硫键形成 中图分类号 1 文赫标识码 c 文章编号 1000-3061{2001)O6-06O8-05 DNA重组技术的发展使得蛋 白质 的生产进入r一个新 圃 时代 大肠杆菌表达体系因其具有低廉性、高教性和稳定性 1 (= 反应) 等优点在科研生产中被广泛应用。然而 ，重组蛋 白在大肠杆 — — — — — — — — 一 J 囊 集 J 菌中的高水平表达经常导致蛋白聚集而形成不溶的、无活性 的包蠲体 。因此 ，自从应用大肠杆菌体系表达基 因工程产品 1包涵体形庸 生———一 — — — — 来 ，』、们就一直通过以下两个方 向的研究 期望得到高活 l 包插体 l 性、高产量 的重组蛋白：()促进重组蛋白在大脑杆菌 中的 口r 囝 1 蛋 白质的合成、折叠与囊集示意图 溶表达 ：改变大肠杆菌的生长条件 ，或使重组蛋 白与其它蛋 F 1 Schemaliediagram forthesyrahesis．folding 白(如分子伴侣、折叠酶等)融合表达或共表达 ，或使重组蛋 and 0nofprote~n 白分泌表达至细菌周质腔 中等策略使重组蛋 白在大肠杆菌 中表达成可溶的生物活性形式。 《2)优化复性过程 ，将包两 环境不利于二硫键的形成。实验证 明，硫氧还蛋白还原酶活 体蛋 白在体外复性得到生物活性蛋 白。由于包涵体中富俞 性缺失突变 的大肠杆菌苗株 ADA494，ADA494(DE3)等有利 重组蛋 白，且包涵体易于分离纯化 ，只要能够在体外成功复 于二硫键在细胞质 内的形成 。 性 ，将是大量生产重组蛋