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反相高效液相色谱分析生理性多胺 赵 鹏 何崇乐 陈俊玲 李 杰 河（南省肿瘤研究所，郑州） 精胺(SP)、精脒(SPD)、尸胺(CA)、腐胺 滤。氢氧化钾 A（R，天津）12.5g溶于500ml (PU)等生理性多胺，广泛存在于动植物和细 双蒸水中，加硼酸 A（R，广州）约15g，调 菌体内，是某些氨基酸脱羧产生的一类含有 pH至10.5，制成衍生剂B液，G5玻砂漏斗过 两个或两个以上氨基的脂族化合物，具有一 滤。A液、B液临用前以1:5(V:V)混匀制成 定的生理功能。1971年，Russell首次提出尿 衍生剂溶液，密闭，于4 避光贮存。 多胺含量的变化可作为诊断癌瘤和监测癌瘤 仪器 日本岛津LC-4A型HPLC仪， 的指标 1〔。此后，不少研究对体液和癌瘤组织 美国DuPontZORBAXODS 2（5cm 中多胺的分析得到类似结果，陆续报道了进 4.6mmI.D.，粒径5m）色谱柱，岛津RF-530 行多胺痕量检测的柱层析高压电泳法 2—〔4 荧光检测器，岛津CHROMATOPACCR- 薄层层析法5〔、气液色谱／质谱法 6〔、高 2AX微处理机及ERMA3320脱气装置。 效液相色谱法 5,7—10、多胺 自动分析法 方法 取多胺标准工作液50放入1ml 11,12、自动氨基酸分析法 1〔3,14〕及放射免 聚乙烯带盖离心管中，加入50l衍生剂，在旋 疫法 1〔5。 涡混合器 上（一医仪器厂，XW-80型）上旋混 本文介绍一种OPA—2-巯基乙醇柱前 15秒，室温下静置 1分钟后，取2l进行色谱 衍生、等组成洗脱，10分钟左右完成四种多 测定。柱温35 ，用保留时间的时间窗法定 胺分离的反相HPLC—荧光检测法。 性 W（INDOW 5），以积分峰面积比内标法 定量。记录纸速5mm/min，衰减ATTEN2。 材 料 和 方 法 标准品 精胺(Spermine)、精脒(Sper- 结 果 与 讨 论 midine)、腐胺 (Putrescine)、尸胺 (Cada- 一（）多胺的邻苯二甲醛衍生物反相 verine)均为瑞士Fluka纯品。内标物1,6-己 HPLC如图1。目前国内主要用高压电泳法 二胺(1,6-Hexandiamine，缩写为HDA),AR 级，北京化工厂产品。分别溶于去离子双蒸 水，制成10mol/ml标准贮备液。以水稀释 成各含等浓度的四种多胺、浓度梯度分别为 2.5，5，10，20和 40nmol/ml及含内标物 20nmol/ml的标准工作液，密闭，于4℃贮 存。 衍生剂 邻苯二甲醛 (o-Phthalalde- hpde)1g，2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol) 5ml（以上均为瑞士Fluka纯品），Brij-35 美（国Serve纯品）0.5g，溶于95ml甲醇(AR， 上海）中制成衍生剂A液，G5玻砂漏斗过 测定多胺2—4；丹磺酰氯柱前衍生的HPLC 表 1 多胺标样 2（0nmol/ml）的天内重现性 法亦有报道 1〔6。HPLC法 比高压电泳—比 色法 1—?4〕简单、快速、准确。Siler提出OPA 等衍生多胺更适于反相色谱 13。许多作者 采用OPA—巯基 乙醇柱后衍生的氨基酸自 动分析法 1〔3，14，并以多元流动相梯度洗 脱，分析时间过长。等组成洗脱比梯度洗脱 简单易行。故我们建立了等组成洗脱的反相 HPLC—OPA柱前衍生—荧光检测多胺法， 10分钟左右使四种多胺及内标物完全分离。 二（）标准曲线如图2。用含内标的五 种浓度梯度的多胺标准工作液衍生后进样各 表 2 多胺标样 2（nmol/ml）的天间重现性 2l进行色谱分析，以各种多胺积分峰面积与 内标峰面积之比对各种多胺浓度在直角坐标 纸上作图是线性的；经用最小二乘法作回归 分析，所得四组回归方程 浓（度范围2