基于RAPD的青天葵遗传多样性及鉴别研究.pdfVIP

· 554 · Research＆ClinicalPharmacology，2009November,Vo1．20No．6 · 质 量 分 析 研 究 · 基于RAPD的青天葵遗传多样性及鉴别研究 杜 勤 ，魏智强，田 军 (广州中医药大学中药学院，广东 广州510006) 摘要：目的 建立及优化青天葵样品总DNA的提取方法及RAPD反应 ，探讨不同品种的青天葵及其替代品、伪品在 DNA分子水平上的遗传多样性及其遗传关系。方法 使用高盐低 pH值法提取总DNA，采用随机扩增多态性DNA， 从49条随机引物中筛选能扩出清晰条带的引物，对22个青天葵样品及伪品进行RAPD分析。用统计分析软件对扩 增出的条带进行聚类分析，以Shonnon’s指数和Nei’s指数对青天葵遗传多样性进行估算。结果 高盐低pH值法提 取的新鲜样品纯度高，药材纯度低，但都能用于RAPD。选取能扩增出清晰条带的19条引物，把鲜品与干品分别聚 类分析。干药材 中小叶与中叶距离较近，与大叶及毛叶距离远。新鲜叶片中三种青天葵为一类，青天葵与其组培 品、毛叶与红薯叶距 离稍远 ，与车前草 、积雪草距 离最远。青天葵种群遗传多样性 Shonnon’s指数为 0．463， Nei’s指数为0．267，种群内遗传多样性较 高，基因流为0．94。结论 不同品种青天葵间及伪品在分子水平上存在 差异，可用此方法鉴别青天葵。青天葵的遗传多样性大多是由地理环境造成的。 关键词：青天葵；毛唇芋兰；毛叶芋兰；遗传多样性；随机扩增多态性 DNA 中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1003—9783(2009)06—0554—04 GeneticDiversityandIdentificationofNerviliaFordiibyRAPD DU Qin，WEIZhiqiang，TIANJun(SchoolofChineseMateriaMedicia，GuangzhouUniversityofChineseMedicine， Guangzhou510006，China) Abstract：Objective TooptimizethemethodfortotalDNAextractionandRAPDanalysisofNerviliafordii(NF)，andto studythegeneticdiversityofdifferentbreedsofNF，thesubstituteofNFandthefakeofNFatmolecularleve1．M ethods We usedlow～pHextractionmediumwithhighsalttoextracttotalDNA，andusedrandomlyamplifiedpolymorphicDNAs(RAPD) toselectpolymorphism primerfrom 49randomprimers．Twenty—twokindsofNFsampleswereanalyzedbyRAPD，andclassi- fledbySPSS．GeneticdiversitywereestimatedbyShonnon’sindexandNei’sindex．Results A higherpuritiyofDNA canbe obtainedfrom fleshHFthanthatfrom medica1materials．W eselected19polymorphism primersfortheclusteranalysisofflesh NFanddriedmedicalmateria1．FormedicalmaterialsofNF，thedistanceofamplificationbandofsmall—leavebreedisclose tothatofmiddle—sizeleavebreed。butisfarawayfrom thatof．big—lcavebreedandNerviliaplicata．Forthefleshmaterials ofNF，therebreedsofNerviliafordiicanbeclassifiedintoonekind，thedistanceoffleshNFbandisfarrfom thatofNervilia plicata， Pachyrhizuserosusandtheculturedbreed，andmorefarawar