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卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 ’( )! /’ )! 年 月 #$$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-. #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌可溶性表达人碱性成纤维细胞生长因子的研究 孙晋华 洪 岸 张 玲 孙奋勇 宋照雷 (暨南大学生物工程研究所 广州 72$0# ) 摘 要:包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的表达量高度相关,在适当的范围内,降低 在表达宿主 ( ) 中的表达,成为实现高可溶性表达的关键。在不改变氨基 ?F8G8 HI#2 J; K(L-M 酸序列的条件下,对 高表达菌株突变重组子起始密码 下游前 个密码子的摇摆 ?F8G8 *5G 碱基进行随机回复突变,共有C 种组合,合成引物NOP 扩增后,克隆至表达载体K;53B,将重 组子转导 ( ) 后, 诱导表达,发现其中 株有较高可溶性和活性的菌株。可 HI#2 J; K(L-M QN5G 2 见部分降低外源蛋白的表达量可以避免与减少包涵体的形成。 关键词:可溶性表达,包涵体,人碱性成纤维细胞生长因子,大肠杆菌,回复突变 中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ( ) R44 * $$$230#$4 #$$ $!3$!!%3$7 人碱性成纤维细胞生长因子( , )是一种有丝 S+9@ F9-=B T=FU’F(9-. ,U’V.? T9B.’U ?F8G8 分裂源,对于中胚层与外胚层起源的细胞有广泛的促增殖作用,参与多种病理生理活动, 因而临床上极具应用价值。?F8G8 分子量小且无糖基化问题,适于原核表达,为目前国际 上生产重组?F8G8 蛋白的主要手段。但是,根据文献,国内尚无非融合表达量超过 2$ W [] 2 的情况 ,本所以前的工作也证明原始的?F8G8 序列直接构建到原核表达系统中,表达很 低。分析原因,主要是 的翻译起始区( , ) 含量高, ?F8G8 5U9@-(9.=’@ Q@=.=9.=’@ P6,=’@ 5QP GO 大肠杆菌的偏好密码子稀少的缘故,本实验室在此方面取得了一定的突破,建立了一套有 [] 2 效的方法,获得高效表达的菌株 (本文定义为 号)。但毫无例外的是,在高表达的同 2 时,包涵体的存在成为又一大障碍。虽然?F8G8 蛋白具有肝素亲合域,能够通过肝素亲 合层析方便地解决纯化问题,因此包涵体的存在,增加了纯化和复性的工艺,从而降低了 产量,增加了生产成本。 包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的过量表达密切相关,不仅是原核生物,酵母 [] 或是高等动物细胞也是如此,甚至是内源性蛋白在过高表达的情况下也会发生此现象# 。

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