树舌多糖GF对HepA瘤细胞C-myc基因表达的影响.pdfVIP

树舌多糖GF 对HepA 瘤细胞C-myc 基因表达的影响1 1 2* 宋高臣 ，于英君 1.牡丹江医学院，黑龙江牡丹江 (157011) 2.黑龙江中医药大学，哈尔滨( 150040) E-mail：yuyingjun53@ ，songgaochen@ 摘 要：目的：为探明树舌多糖GF 对HepA 瘤组织c-myc 基因表达的影响。方法：运用原 位杂交法、SP 免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA 瘤细胞中C-myc mRNA 量及 C-myc 蛋白的表达量。结果：树舌多糖组、猪苓多糖组中 C-myc mRNA 量及 C-myc 蛋白的表达量均显著低于荷瘤组（P ﹤0.01 ），树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差 异。结论：树舌多糖GF 可通过降低C-myc mRNA 量及C-myc 蛋白的表达，而抑制HepA 瘤细胞的增殖。 关键词：树舌多糖GF，HepA 瘤细胞，C-myc 基因 中图分类号：R73-3 树舌多糖 GF 是从真菌科植物树舌中提取的一个组分，有明显抗肿瘤的作用；能明显抑 制 HepA 瘤突变型 P53 基因、N-ras 基因和提高 P16、Rb 的表达量[1-3] 。癌基因c-myc 的表达 产物为分子量 62Kd 的核内蛋白，许多实验通过Northern 印记杂交技术，原位杂交组织化学 等方法证实在急性白血病、淋巴瘤、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、胃癌、肺 癌等人类恶性肿瘤都有 C-myc mRNA 高水平表达[4] 。本研究应用原位杂交技术和免疫组化 技术检测树舌多糖 GF 对 HepA 瘤细胞 C-myc 基因表达的影响，以进一步探讨树舌多糖 GF 抗肿瘤的机制。 1．材料和方法 实验动物 昆明种小白鼠，（20±2 ）g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学实验动物中心 提供。 瘤株 由黑龙江省肿瘤研究所引进，以腹水传代。无菌取腹水，以0.2ml/只接种于小鼠 右侧腋窝下。 分组 将接种后的小鼠随机分成三组：树舌多糖组、猪苓多糖组及荷瘤对照组。接种 6 小时后，各组（空白对照组除外）注射给药 0.15ml/只，荷瘤对照组腹腔注射 NS ，猪苓多糖 组以 5mg/kg 肌注，树舌多糖 GF 组按 50mg/kg 腹腔注射，连续 10 天，直到荷瘤组肿瘤达到 1g 以上，于末次给药24h 后处死小鼠，剥离肿瘤组织。 主要试剂及仪器 原位杂交检测试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品；DEPC 和 原位杂交专用盖玻片为 Sigma 公司产品；SP 免疫组化检测试剂盒和 DAB 染色试剂盒为北京 中山生物工程公司产品；C-myc 抗体为武汉博士德生物工程有限公司产品；树舌多糖 GF 粉 针剂由本教研室制备；猪苓多糖注射液为连云港正大天晴制药有限公司产品，苏卫药准字 1999 第 185701 号，批号 2000313 ；OLYKMPUS 显微镜；多媒体彩色病理图文分析系统。 C-myc 基因 mRNA 测定 取瘤组织经 10%多聚甲醛固定、石蜡包埋，切 0.5µm 切片。 按说明书操作：石蜡切片常规脱蜡至水→3%H2O2 室温孵育 10min→蒸馏水洗两次→滴加胃 蛋白酶消化 15min→PBS 洗 3×5min 蒸馏水洗一次→滴加预杂交液 37℃3h→滴加杂交液加盖 原位杂交专用盖玻片 37℃过夜→30-37℃2×SSC 洗 2×5min→0.5×SSC 洗 15min→0.2×SSC 洗 15min→滴加封闭液 37℃30min→滴加生物素化鼠抗地高辛 37℃60min→PBS 洗 4×5min→滴 1本课题得到黑龙江省科技厅的资助（黑龙江省科技攻关项目，编号 G00C200902 ）。 - 1 - 加 SABC37℃