纳豆激酶活性测定方法的研究.pdfVIP

药物生物技术 140 Pharmaceutical 2006，13(2)：140～143 Biotechnology 纳豆激酶活性测定方法的研究 熊迎新1，尹宗宁h，杨超1，孟延发2 (1．四川大学华西药学院；2．四川大学生命科学院，四川成都610041) 摘要从专属性、灵敏度及实际操作的可行性等几个方面，对TAME法和纤维蛋白平板法进行了比较研 究。结果：TAME法灵敏度高，操作简便，适合作为常规的分析检测手段，而平板法虽专属性高，却操作繁琐，适 宜于定性分析。结论：利用TAME法与平板法各自的优点，将两者结合起来作为纳豆激酶的活性检测方法，可 达到高效灵敏、专属性强的目的。 关键词纳豆激酶；溶栓酶；活性测定方法 中图分类号：Q55 文献标识码：A 文章编号：1005～8915(2006)02一0140一04 自1987年日本学者须见洋行发现纳豆激酶 纤维蛋白原，中国药物生物制品检定所，批号 140607—200333，74 (nattokinase，NK)有溶栓活性以来，国内外有许多 mg／支； 学者相继在基本酶学性质、药理作用、制备及纯化 琼脂糖，上海东海制药厂，批号031201； 方法等方面做了大量较深入的研究，但这些研究都 凝血酶，中国药物生物制品检定所，批号605， 必须以灵敏的活性测定方法为基础。纳豆激酶的 210Bpu／支。 活性测定方法大致可分为2类：一是通过生物学方 1．2实验仪器 法，利用纳豆激酶溶解纤维蛋白的特性测定其纤溶 活性，比如经典的溶栓酶的测活方法一一纤维蛋白 分析仪器中心)； 平板法[1|、纤维蛋白块溶解时间法[2|、试管法[3|、玻HH一2数显恒温水浴锅(国华电器有限公 司)； 珠法r4|、酶标板法[5‘61等，这些方法专属性较好，但 灵敏度较低。另外一种是以纳豆激酶的水解活性 游标卡尺等。 为基础来测定其活性，比如TAME法[4’7]、酪蛋白 2方法 水解法[8j、四肽底物法[9]等，这些方法灵敏度较高。 本实验室对纳豆激酶的活性测定方法进行了研究， 2．1 1、AME底物法 发现TAME法和纤维蛋白平板法比较理想。 纳豆激酶对精氨酸羧端肽有较强的切割作用， 可选择对甲基苯磺酰一L一精氨酸甲酯(TAME)为 1仪器与材料 底物测定酶活性。在37℃下纳豆激酶将底物切割 1．1实验材料 成对甲基苯磺酰一L一精氨酸和甲醇，高锰酸钾将 纳豆激酶酶液，本实验室自制 甲醇氧化成甲醛，甲醛再与变色酸在沸水浴中发生 显色反应，生成蓝紫色复合物。此复合物颜色稳 对甲基苯磺酚L一精氨酸甲酯(Na—P—Tosyl— ester L-argininemethylhydrochloride，TAME)，Sig—定，在574nm处有最大吸收，检测灵敏度高。 rr；a公司出品； 尿激酶标准品，中国药物生物制品检定所，批 液中存在一些多糖和小分子杂质，多少会干扰 号140604—200221，690IU／支； TAME法对NK酶活的测定，因此需要采取措施 收稿日期：2005—06—27修回日期：2005—09—28 基金项目：四川省科技攻关项目，项目编号：0