臭氧对禽流感病毒灭活作用的研究.pdfVIP

臭氧对禽流感病毒灭活作用的研究 1 1 2 尹波 ，张小刚 ，关云涛 1.哈尔滨久久臭氧技术研究所，哈尔滨（150090 ） 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨（150001 ） E-mail ：yb@ 摘 要：本研究采用高能态臭氧，针对臭氧对禽流感病毒的体外灭活作用，臭氧对禽流感病 毒的空气传播的阻断作用，及臭氧对接触传染的同居流行病学作用进行了研究。体外灭活的 初步结果表明，高能态臭氧可以在短时间灭活体外的禽流感病毒，使其 100%丧失侵染的能 力，并获得了完全阻断禽流感病毒的空气传播效果；同居感染的实验结果表明，高能态臭氧 的施用，显著地延迟了发病时间与发病率。 这一研究结果预示着，臭氧极为可能成为替代 目前在禽流感卫生防控中所应用的有害的化学药剂，如甲醛等；彻底地改善目前的禽流感防 疫系统，降低对禽流感疫苗的依赖性，减缓禽流感病毒的变异的速度，从而创造一个新型的、 稳定的、绿色环保的养殖卫生体系。 关键词：禽流感，高能态臭氧，Ｈ５Ｎ２病毒，SPF 鸡 中图分类号：S858 禽流感是一种由正黏病毒科A 型流感病毒引起禽类从呼吸系统到严重全身败血症 等多种症状的传染病，这类流感病毒有大量天然宿主。高致病性禽流感病毒的传播是多 维的，如空气、粪便、饲料和饮水等；近年来蔓延全球的烈性禽类传染病，暴发频率呈 几何级数增加，并已跨越“种间隔离”袭击和传染人类。禽流感病毒传染给人的死亡率高 达60% 。到目前为止，世界上大约有60 人死于禽流感。如果禽流感交叉感染反复发作， 病毒基因极易发生变异，就有可能造成人与人之间传播的空前灾难，后果不堪设想。禽 流感问题已不仅是关系食品安全的一般问题，而是危机人类的健康、生存和发展的严重 问题。如何克服目前防控体系的缺陷，降低病毒的变异速度，有效地阻断病毒的传播途 [1] 径，创建新型的防控体系是解决禽流感问题的关键所在 。 臭氧(O )是氧(O ) 的同素异构体，为暗蓝色气体，在1840 年由德国的Schorbein C 发 3 2 现并命名[2] 。该气体是一种强氧化剂，在消毒学上属于过氧化物类消毒剂，同时具有使 用方便，刺激性低作用快速杀灭病原种类多不污染环境等特点。研究表明，臭氧可破坏 囊膜病毒的外膜蛋白中的不饱和键，这种生化作用的传递几乎是瞬时的，从而可以快速 的灭活囊膜病毒[3] 。 本研究通过三种不同的途径（干燥病毒样品、空气中病毒、接触传染）对臭氧灭活 禽流感病毒的效果进行了研究。 1．材料与方法 1.1 实验材料 DHX-SS-1G 实验室用高能态臭氧发生器（由哈尔滨久久电化学工程技术有限公司提 供）；H5N2 病毒干燥样品载玻片；H5N2 病毒悬液；负压隔离器；9-10 日龄SPF 鸡胚。 1.2 实验方法 1.2.1 体外灭活实验 按照实验室用臭氧发生器使用说明书规定程序操作，对负压隔离器 1 立方米密闭空 间内放置的涂布有禽流感病毒(H5N2 株)悬液和干燥病毒样品的载波片分别进行10 分钟、 - 1 - 15 分钟、20 分钟和30 分钟的消毒效果检测；不同处理的样品分别接种4 枚9-10 日龄 SPF 鸡胚，每胚0.2ml,经37 ℃72 小时孵化，去掉24 小时内死胚。用0.5%鸡红血球悬液 与鸡胚尿囊液做血凝实验。 1.2.2 空气中病毒传播阻断实验 在两台负压隔离器内各饲养8 周龄SPF 鸡 15 只，其中一组作为对照；按照实验室 用臭氧发生器使用说明书规定程序操作，保持负压隔离器温度为22 ℃，湿度50%，打开 臭氧发生器(保持2L/min 气体流量);隔离器内通入臭氧10 分钟后通过气溶胶发生器向隔 离器内喷入2ml107.5EID50/0.1mlH5 亚型(H5N2)病毒悬液;继续通入臭氧60 分钟后关闭臭 氧发生器；7 天后无菌采集隔离器内SPF 鸡肺脏，对照组与实验组每