金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 ’( )!! 0’ ) 年 月 #$$! %# !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-.+/ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究 ， % # % # % 张银波 姜 琼 江木兰 马立新 % （湖北大学 分子微生物学与基因工程研究室 武汉 !2$$# ） # （中国农业科学院油料作物研究所 农业部油料作物遗传改良重点开放实验室 武汉 !2$$# ） 摘 要：综合运用 末端快速扩增（ ， ）和基因组步行等技术克隆到一个金 ,*03 F8G=H 3-G(=I=,8A=’ ’I ,*03 HJ F3K 针菇（ ）的漆酶结构基因和其对应的全长 ，经测序和 比对分析表明该基因属于多铜 !#$$%’# ()%*+), ,*03 LM3N5 氧化酶基因家族，与已发表的漆酶基因（ ）的同源性最高，在氨基酸水平为 。该结构基因命名为 37%4#2$ 4# O -. ， 命名为 ，其序列提交 ，登录号分别为 和 。将 的开放阅读框克隆到 //!( ,*03 //!( P+L8Q 3R!1S1# 3R!S$!$ //!( 毕赤酵母表达载体 ，转化毕赤酵母 且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母 （ ）诱导产 GTLU;$ PN%%S PN%%S GTLUSS 酶，在培养温度 、甲醇流加量为 （ ）的情况下，其分泌表达的 的最高酶活为 ，最适反 #$V %W$ O 6 MKK7X $ W %$4$ Y6-M 应温度为 ，最适反应 值为 ，在最适反应条件下其热稳定性和 值稳定性均较好。 !SV GT 2 W; GT 关键词： 末端快速扩增，基因组步行，漆酶基因，毕赤酵母，分泌表达 ,*03 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Z;