高水解度大豆肽的制备.pdfVIP

……，。’’。’，。’’’ 表1五种酶推荐的最适pH和温度 其不良底物，另外其价格tE比较昂贵，因此，胰蛋白 从正交表的分析可以看出，最适作用温度为 酶不足以作为制备高水解度大豆肽的理想酶制剂。 550C，但在实验选定的pH内水解度却一直在增加， ASI．398和木瓜蛋白酶价格相对便宜，酶活又很接 为了寻找最佳的pH条件，在温度为550C，pH为8．8 近，4h后单位酶活对大豆蛋白质的水解能力(水解 的条件下，进行了大豆蛋白的Acalase酶水解，实验 度)分别约为：0．000131％，0．0000467％。可见， ASl．398对大豆蛋白的作用能力要强于木瓜蛋白酶。 的值低，因此我们可以说在pH8．5时水解度取得最 在所试用的五种蛋白酶中，Alcalase单位价格的酶活 大值，所以确定最适pH为8．5。 最高，水解能力最强。胃蛋白酶的作用情况没有出现 在确定的最适温度和pH下．保持底物浓度、底 在图中，用TNBS法测定，在2h和5h时它的水解度 物总量(809)不变，改变酶的使用量，分别加入0．5、 都是2．61％，可见它水解能力也很差，这一方面可能 1．O、1．5和2mL酶，得到水解进程曲线如图2所示。 是因为其酶活比较低，可以通过增加酶量的方法给 予提高，但这会大大提高生产成本；另一方面可能是 因为大豆蛋白是其不良底物。综合以上各个因素，决 冰 定选用水解能力强而又价格相对便宜的Alcalase和 一 心 ASl．398两种酶作为制备高水解度大豆肽的制剂。之 堪 所以要选用两种酶，是因为二者作用的肽键性质不 * 工艺技市 同，如Alcalase是内切肽酶，水解的肽键是羧基端含 有Tyr、Phe、Tyr等残基，而ASl．398水解的肽键却具 勰拍M挖加墙埔H佗m86420之4 有广泛的专一性[41，因此在相同的水解度情况下，两 时I司(min) 种酶的水解产物可能具有不同的功能性质。 图2酶的添加量对水解度的影响 2．2 Alcalase水解大豆蛋白质最佳条件的确定 从图中可以看出，随着酶量的增加，水解度是上 由于同种蛋白酶对不同的底物具有不同的最适 升的，但酶的添加量从lmL增加到2mL时，最终水 温度和pH，因此有必要对酶作用于大豆蛋白时的最 解度增加不是太大；加酶量从0．5mL增加到1mL时， 适作用条件进行讨论。本文采用了正交试验，试验方 酶反应速度增加明显，因此，从经济上考虑选用酶的 法和结果见表3，反应时底物浓度是8％，底物／酶比 最佳添加量为809底物蛋白中加入lmL的酶液，即 为80(g／mL)，反应时间为4h，正交表中的水解度即底物／酶量比为80：1。 为4h的水解度。 2．3 ASl．398酶水解大豆蛋白最佳条件的确定