03紫外-可见分光光度法2012-2.pptVIP

紫外—可见分光光度计的应用 一、定性分析 通常根据吸收光谱的形状、吸收峰的数目以及最大吸收波长的位置和相应的摩尔吸收系数进行定性鉴定。 一般采用比较光谱法：即在相同的测定条件下，比较待测物与已知标准物的吸收光谱曲线，如果它们的吸收光谱曲线完全等同，则可认为是同一物质。 在进行定性鉴定时，需要注意： 1.测试溶剂：应当对标准物和待测物有良好的溶解度，本身在测定的波长内无光的吸收，有良好的稳定性。 2.测试的条件：标准物和待测物测试条件要完全相同，如溶剂、PH、离子强度、温度及所用仪器等。 3.更改测试条件：为了防止测试数据的假象，要对现有某些条件进行适当的变换，改变其中的某些测定条件，然后看标准物和待测物的吸收光谱是否仍然完全相同。 二、结构分析 判断所含官能团、有机化合物的同分异构体。 （例如：某一化合物在250-300nm有强吸收带，则表示存在苯环的特征吸收；若在210-350nm有强吸收带，则可能含有两个双键的共轭单位。） 三、纯度鉴定 根据在吸收光谱最大吸收峰的位置和峰形状、数量判断该物质的纯度。 四、定量分析 根据朗伯—比尔定律，物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。所以通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，便可求得溶液的浓度和含量。 紫外可见分光光度法不仅用于测定微量成分，而且用于常量组分和多组分混合物的测定。 ★同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax。 ★同一物质的浓度不同时，光吸收曲线形状相同，最大吸收波长不变，只是相应的吸收度大小不同。 ★物质不同，其分子结构不同，则吸收光谱曲线不同，最大吸收波长也不同。 所以可以根据吸收光谱曲线对物质进行定性鉴定和定量分析。 (一)单波长分光光度法 1.单组分物质的定量分析 （1）比较法：在相同的条件下配制样品溶液和标准溶液（与待测组分的浓度近似），在相同的实验条件和最大波长处分别测得吸光度Ax和As，然后进行比较，求得样品溶液中待测组分的浓度，Cx= Cs×(Ax/As)。 （2）标准曲线法：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，在最大吸收波长处分别测得标准溶液的吸光度，然后，做A-c的校正曲线（理想的曲线应为经过原点的直线）。在完全相同的条件下测出试液的吸光度，并从曲线上求得相应的试液的浓度。 根据加合性原则，解联立方程法 关键问题： 选择波长组合λ1 、λ2的基本要求： ⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度。测得的吸光度差ΔＡ只与待测组分的浓度呈线性关系，而与干扰组分无关。 ⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。 三、示差分光光度法 常规的分光光度法是采用空白溶液作参比，对于待测组分含量较高时，相对误差较大，这时需采用示差分光光度法。 示差法是以浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比，测定待测溶液的吸光度值。 1.在土壤和植物分析中的应用 氮、磷、钙、镁、铁等。 2.污染物的成分及含量的测定 水、土壤、空气、植物、粮食中污染物的鉴定和定量 分析。如农药残留、大气中污染物的分析测定等。 3.动、植物生物成分的分析 动、植物脂肪酸的分析，蛋白质、氨基酸、核酸的测定等。 4.在园艺植物上应用 维生素、色素（花色素、叶绿素、黄色素、花青素） 多酚类物质、碱类物质（总生物碱）、黄酮类物质 多糖、有机酸、氨基酸、核酸 （1）标准溶液的配制 （2）供试样品溶液的配制 （3）最大波长的确定（波长扫描） （4）标准曲线的绘制 （5）供试样品含量测定 紫外-可见吸收光谱分析影响因素 一、影响因素： 1.温度：室温下，温度变化不大，对分子的光吸收值影响不大，但在低温时，临近分子间的能量交换减少，使光吸收强度比室温高10%左右。 2.PH值：同一物质在不同的PH值溶液中，有不同的解离度，其吸光值有所不同。 3.溶液浓度：待测溶液浓度过高过低，会使溶液中的某些分子发生变化，影响测定的精度。 4.仪器狭缝宽度：如果单色器的狭缝质量不好或开的太大，则单色光的单一性差，杂波会干扰测定，引起测定误差。 5.背景吸收：待测样品中存在一些杂质，在待测样品所测定的波长下有较大的光吸收，造成背景吸收，使待测物质的吸光值增加或引起待测物质的吸收光谱相重叠。 （一）光度测量误差（偏离朗伯—比尔定律） 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比尔定律的偏离。 引起这种偏离