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第三节 紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度计光路图 及主要部件 组成部分：进（出）口狭缝、准直 镜、色散元件 色散元件： 4. 检测器: 常用光电效应仪器。将光能转换为电能——光电检测器 光电池 光敏半导体，光照产生电流，一定范围，电流与光强成正比。 硒光电池 :用于可见光区 硅光电池：用于紫外-可见光区 特点：光电池内阻小，电流难放 大，用微电流计直接测，适 于单色光谱带宽S较大的低 档仪器；易“疲劳”。 光电管 特点：内阻较大，光电流易放大 紫敏光电管：200nm～625nm 红敏光电管：625nm～1000nm 红敏光电管铯阴极 构造：阳极和光敏阴极 紫敏光电管银氧化铯 组成的真空二极管 光电倍增管 构造：与光电管相似，但在阳极和阴极之间增加了9个倍增极。 特点：灵敏度更高 光二极管阵列检测器 （photodiode array detector） 构造与原理： 晶体硅上紧密排列一系列光二极管检测器，光透过晶体硅时，二极管输出的电信号与光强成正比。 二极管数目越多，分辨率越高 特点：能快速光谱采集 例：HP8452A型二极管阵列，在190nm～ 820nm范围内，由316个二极管组成 。每一个二极管，可在1/10秒内。每隔2nm测定一次，可同时并行测得316个数据，1/10秒就获得全光光谱。 二极管 1 2 3 …… 316 测定λ（nm） 190 192 194 …… 820 而一般分光光度计（光电管或光电倍增管），波长测定范围和间隔不变，测定速度1/10秒，则从190nm～820nm，需扫描31.6秒才得全部数据。 显示器： 电表 数字显示 荧光屏 打印结果 曲线扫描等 波长范围: 波长准确度: 波长重现(复)性 透光率测量范围 吸光度测量范围 光度准确度 光度重复性 分辨率 杂散光 单光束分光光度计 双光束分光光度计 光多道二极管阵列检测的分光光度计 比尔定律适用条件: 稀溶液，单色光 第四节 偏离Beer定律的因素及减少  测量误差的方法 原因：浓度较大时， 入射光不纯对吸光度的影响： 设有两束不同波长的光λ1与λ2被被测物吸收，吸收系数分别为E1与 E2，两种光各以强度为I01与I02同时入射试样，则 故此混合光的透光率为： 非平行光 散射光和反射光 吸收池 用空白溶液补偿 配制空白液（不含被测组分，其它成分与试液基本相同），测定时有3步 骤： 若存在以下两种情况，则不能完全用空白液补尝： 1、大分子试样（胶体、蛋白质类）或浑浊试样，因质点大，散射光强，不易配制相同的空白液补尝，使透射光减弱，A值偏高 2、试样溶液与空白溶液的折射率有较大的差异 一些不在谱带宽度范围内的与所需波长相隔较远的光，称杂散光。 由于仪器噪音的影响，仪器测量T值过程中，存在一定幅度的偶然误差ΔT，它对测定结果的相对误差的影响可由Lambret-Beer定律导出： 透光率测量误差 来自仪器的噪声。 仪器的噪声有两类： 暗噪声：与光信号无关。 散粒噪声：随光信号强弱而变化。 (1)暗噪声：由光电检测器或热检测器与放大器电路等各部件的不确定性引起的。工作条件一定时， 可视为定值 高精度仪器： 大多数仪器： T% A T% A 95 0.022 10.2 40 0.399 1.36 90 0.046 5.3 30 0.523 1.38 80 0.097 2.8 20 0.699 1.55 70 0.1