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A C a b (a) A C a b (b) A C (c) （a）— 显色剂用量在a ~ b为适宜范围； （b）— 显色剂的浓度必须严格控制； （c）— 不能用于定量分析。 （二）显色条件的选择 1. 显色剂的用量 显色反应： M + R ? MR 待测组分 显色剂 有色化合物 显色剂的用量通过试验确定：作A-CR曲线，常见以下三种情况： 3. 温度 作 A-T （℃）曲线，选择在 A 较大的温度内进行。 4. 时间 作 A-t（min） 曲线，选择在 A 较大且稳定的时间内进行。 2. 酸度 （1） 酸度对显色剂颜色的影响 — 某些酸度下的颜色可能干扰测定。 （2） 酸度对显色反应的影响 — nHR ? nH+ + nR- + Mn+ ? MRn （3） 酸度对金属离子存在状态的影响 — 防止水解，防止沉淀生成 适宜的 pH 通过实验确定：做 A- pH 曲线（其它条件并不变），从中找出 A 较大且基本不变的某 pH 范围。 四、 有机化合物结构的研究 1.推测官能团 200～280nm 无吸收 不含不饱和键，不含苯环， 可能是饱和化合物 210～250nm 强吸收 π—π*，2个共轭单位 260～300nm 强吸收 π—π*，3—5个共轭单位 250～300nm 弱吸收 n—π*，无强吸收， 孤立含杂原子的双键C=O, -NO2, -N=N- 260nm（230～270）中吸收 π—π*，有苯环 2. 判断同分异构体 酮式结构，无共轭 中吸收 206nm (极性溶剂中为主） 烯醇式结构，共轭体系， 强吸收ε =1.8?104, 245nm (非极性溶剂中为主） 例：乙酰乙酸乙酯 3. 化合物骨架的推定 未知化合物与已知化合物的紫外光谱一致时，可以认为两者具有相同的生色团。 第五节 定性和定量分析 一、定性分析 二、定量分析 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法 多组分的定量方法 三、比色法 四、紫外光谱在有机化合物结构研究中的应用 一、定性分析 （一）定性鉴别 定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数 续前 1．对比吸收光谱的一致性 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较 续前 2．对比吸收光谱的特征值 续前 3．对比吸光度或吸光系数的比值： 例： 续前 （二）纯度检查和杂质限量测定 1．纯度检查（杂质检查） 1）峰位不重叠： 找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量 2）峰位重叠： 主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形 续前 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ 310nm下测定 规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06% 二、定量分析 （一）单组分的定量方法 1．吸光系数法 2．标准曲线法 3．对照法：外标一点法 续前 1．吸光系数法（绝对法） 练习 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度。 解： 练习 例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 解： 练习 例： 解： 续前 2．校正曲线法 示例 芦丁含量测定 0.710