HPLC重点汇总.docVIP

HPLC重点汇总HPLC重点汇总1.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？改变流动相组成和温度；改变柱长、柱内径和填料粒度；柱突然阻塞压力升高（正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的）。2.什么是强溶剂、弱溶剂？改变流动相的组成或溶剂溶剂强度就可以改变峰容量因子和保留时间。在一定条件下，减少保留时间或缩短分析时间的溶剂为强溶剂，增加保留时间或延长分析时间的溶剂为弱溶剂。3.怎样才会使峰位发生重排？在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度（组成百分比）而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。下列条件改变可能发生峰位重排：流动相中换了强溶剂；PH值的改变；柱填料的改变；柱温的改变；流动相的组成改变（如加入离子对试剂三乙基胺等）。4.系统会对峰宽产生哪些影响？过样体积、连接管路、各个接头和检测器体积。5.如何建立一个成功的色谱方法？选择合适的液相色谱方法；选择合适的色谱柱；选择合适的峰容量因子值的条件；选择良好的峰位；选择良好的色谱柱条件；用实测样品解决出现的特殊问题；证实方法的正确性。6.常用的实验室脱气方式有哪些？氦脱气，此方法脱气效果最佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用；加热脱气。7.如何评价一个色谱柱的优劣？评介一根色谱柱的主要指标是：塔板数、峰不对称因子、柱压降和键合相浓度。8.什么是时间常数？时间常数实际上是响应时间的设定，起着过滤噪音的作用。时间常数太小（太快）可能增加短噪音，时间常数太大（太慢）可能出宽峰、拖尾峰和矮峰。9.怎么样在实验过程中用改良剂？在流动相中加醋酸盐，酸性组分的峰形得到改善，而碱性组分可同时加碱性和酸性改良剂，如1%醋酸盐和10M三乙胺。10.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？所用的流动相在检测波长下有吸收，而进在此波长下没有吸收的溶剂，在流动相中会出现洞穴，通过柱后出现倒峰。11.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？用比流动相强度大的大体积样品进样，通常会损害色谱图的质量。应遵循下列规则选用溶剂溶解样品：A最好用流动相溶解样品进样10-15。B用大体积弱溶剂溶解样品，如反相色谱中用水溶解样品进样100-500。主要缺点是每次进样后在色谱图的开头出现大的负峰，有时还波及到样品峰。C需要时用10-25强溶剂溶解进样。 12.什么是次级保留效应？在良好的色谱分离中，样品分子是以单一的保留过程被保留。如在反相色谱中，溶质与柱填料的非极性烷基链发生疏水性相互作用。但在以硅胶为基质的填料中，有些样品组分能与硅醇基团相互作用。这是次保留过程，使峰严重拖尾。有限的强基质被消耗掉，柱对有些组分过载，这些过载组分继续与次级基质发生相互作用，发生作用后，脱附的过程很慢，引起了峰拖尾。对付次保留效应最有效的方法就是加入一些流动相改良剂。13.前延峰的发生及处理？因柱温问题很易引起前延峰，有些样品在常温下分离可见前延峰，升高温度后前延峰的现象消失。在离子对色谱中，前延峰的另一个原出是用非流动相作样品溶剂。因此在离子对色谱中要求仅用流动相溶解样品，而且进样量不要大于25-50，否则会导致前延峰或其它问题。造成前延峰的第三个原因是流动相分离阴离子样品很快从填料的孔隙中被排斥出来。使用高浓度缓冲液，即增加流动相的离子强度，可以克服前延峰的效应。14.峰变宽的原因？A在使用过程中柱本身退化，逐渐降低柱效。B柱外峰宽效应。一根专用柱用于另一液相色谱系统可能引起塔板数降低，说明新系统有很大的柱外峰宽效应。C化学效应。色谱因素和化学因素同时影响塔板数。色谱因素前已述及，化学因素多数是流动相和固定相相互作用所致。改变流动相可使宽峰有所改善。15.柱平衡慢的常见原因有哪些？柱平衡慢的常见原因是，组分在旧的或新的流动相中对柱吸附强，或者在新的流动相中浓度小甚至为零。A流动相含有胺改良剂；B流动相含有离子对试剂；硅胶柱；流动相中有四氢呋喃。可考虑采用专用柱用于特殊的方法（上面提到的四种情况的一种），不用时将柱折下来，注满适当的溶剂或流动相，密封保管，不再作其它的分析。 16.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？A内标物的结构或理化性质应与被分析组 分相似或相近；B内标物的保留值应稍大于或小于被分析物的保留，不能相差过大；C内标物的峰要与所有被分析物的峰有良好的分离度（R大于1.5），不能让内标物成了干扰物；D无结构相似的内标物，可用保留相近的内标物。17.梯度洗脱的问题？正常的梯度洗脱用于分离极性范围广的组分，最后一个峰的等度保留必须大于第一个峰。在等度分离中