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非组织制片方法有哪些？ 组织分离标本、组织活体标本、组织涂片标本、磨片标本、整体封存（压片）标本、组织铺片标本、组织印片标本等。 二、组织切片法的种类(根据所使用支持物质不同) 1.石蜡切片法2.火棉胶切片法3.冰冻切片法4.超薄切片法（电镜技术）5.树脂切片6.碳蜡切片 三、组织切片的主要程序 取材、固定—脱水—透明、浸渍—包埋、切片—贴片、染色—浸洗—脱水—透明—封固 四、标本主要来源及取材主要注意事项 标本主要来源：临床活体检查，手术切除，病理解剖，实验动物等。 组织取材注意事项：1、材料保持新鲜。2、标本大小适宜。3、勿使组织块受挤压。4、尽量保持组织的原有形态。5、选好标本切面。6、保持材料的清洁。7、切除不需要部分。8、明确编号，登记。 五、何谓固定，常用固定方法及固定液有哪些？ 标本（组织）固定：是指从人体内或动物体内取下的材料立即浸 泡在化学试剂中，借助化学试剂的作用，将组织细胞结构保存起来，使其形态结构近似生活状态的一种手段。 固定方法：蒸汽固定法，标本固定（浸泡固定），灌流固定（局部固定——心脏、睾丸、肺，全身固定（灌注量和灌注压使全身灌注过最重要的两个因素）——适用于缺氧敏感的组织）、涂片固定（浸泡固定、滴液固定）、散在细胞固定、微波固定。 固定液：1、单纯固定剂：甲醛、多聚甲醛、乙醇、醋酸、苦味酸、锇酸、丙酮、重铬酸钾、戊二醛等。 2、混合固定液：Karnoversy’s改良液、Bouin液、Zenker液、A-F液（乙醇-甲醛液）、Carnoy液、Zamboni′s液、PLP液。 六、何谓脱水，常用脱水剂。 脱水：利用某种化学试剂逐步将标本内部吸收的水分臵换出来，以使标本处于无水状态，这一过程叫脱水。 常用脱水剂：1.单纯脱水剂：如乙醇、丙酮和甲醇。其组织在脱水后必须再经二甲苯透明才可浸蜡。常用乙醇 2.脱水兼透明剂：如正丁醇、叔丁醇等，组织在脱水后即可直接透蜡，不必经过中间溶剂如二甲苯之类的试剂。 七、石蜡包埋程序 1）组织取材3mm厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。2）组织流水冲洗6-12h。3）70％酒精2-4h。4）80％酒精2-4h。5）90％酒精2-4h。6）95％酒精（Ⅰ、Ⅱ）2-4h。7）100％酒精（Ⅰ、Ⅱ ）1-2h。8）二甲苯（Ⅰ）5-30min。9）(二甲苯（Ⅱ） 5-30min)。10）浸蜡（Ⅰ、Ⅱ ）2h。11）组织包埋 八、石蜡切片与冰冻切片的优缺点 石蜡切片的优点：? 标本大小灵活? 切片厚度均匀（1-200μm）? 可少量或批量制作? 切片保持时间长 缺点：? 不能很好地保存细胞组织内酶或抗原的活性? 脂肪被溶解 ? 不能保障大且坚硬组织的切片质量 冰冻切片的优点：? 切片制作时间短? 较好的保存脂肪和类脂、酶及抗原活性? 可应用于脂肪显示，酶的定位、定性甚至定量、组织荧光、免疫荧光和放射自显影等方面 缺点：? 标本结构和形态的显示逊色于石蜡切片? 冷冻过程中易形成“冰晶”? 难以制作连续切片和薄的切片 九、普通染色、特殊染色、复染、凋亡小体定义 普通染色：最广泛应用的是苏木精和伊红染色，又称常规染色。 特殊染色：为显示特定的组织结构或其他的特殊成分。 复染色：衬托主染色所进行的染色。 凋亡小体：细胞凋亡过程中，胞核和胞质经常出芽和碎裂成一些 有包膜包被、内涵物不外溢的小块，即凋亡小体。 十、酶组织（细胞）化学定义、常用方法。 定义：用组织（细胞）化学方法显示酶在组织或细胞内的定位技术。 常用方法：酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、三磷酸腺苷酶、乙酰胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、一氧化氮合酶 十一、免疫组织（细胞）化学分类及突出优点 免疫细胞化学技术可分为：免疫荧光细胞化学技术、免疫酶细胞化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫金-银细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。 优点：高度的特异性，敏感性高，方法步骤统一，形态、机能和代谢密切结合。 十二、抗原、抗体的概念，多克隆抗体和单克隆抗体概念及特性 抗原：凡是能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原，物质具有的这种特性称为抗原性。 抗体：是机体受抗原刺激后，在体液内出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白，称免疫球蛋白。含免疫球蛋白的血清称免疫血清。 多克隆抗体：一株B淋巴细胞（一个克隆）只能产生针对一个抗原决定簇的抗体，那么由许多株B淋巴细胞针对多个抗原决定簇所产生的抗体就称为多克隆抗体。 单克隆抗体：针对某单个抗原决定簇、由单株B淋巴细胞所产生的抗体，称为单克隆抗体。 特性：单克隆抗体特异性强，多克隆抗体反应谱广。 十三、免疫组化SP法操作步骤 1、石蜡切片脱蜡至水（或恒冷箱切片）。2、 0.01mol/L PBS洗，2×5min 。3、 0.3%H2O2--甲醇，室温孵育10min（以消除内