硫化氢对Aβ2535致PC12细胞损伤的保护作用.pdfVIP

·2212· 硫化氢对A[325。5致PCI2细胞损伤的保护作用 陈秀琴唐小卿1 李景田赵春梅2 冯鉴强2 (韶关学院医学院，广东 韶关512026) (摘要】 echst染色检测细胞凋亡，碘化丙啶染色流式细胞技术检测细胞凋亡率。结果5—80 著降低(PO．01)、凋亡率明显升高(P0．01)；100gmol／LNariS与20pJllol／L h后，NariS浓度依赖性地阻断 Ap25埘共同作用于PCI2细胞24 AB为-35引起的PCI2细胞存活率降低，升高了的细胞凋亡率(PO．OI)。结论H2s对AB25一拈致PCI2细胞损伤具有保护作用。 [关键词】硫化氢；B-淀粉样多肽；凋亡；细胞保护 [中圈分类号】1038．1【文献标识码]A [文章编号】1005-9202(2006)22-2212-03 SO nnl 硫化氢(H：S)广泛参与机体多种生理和病理过程，被认为 150山／孔，待甲质完全溶解后，用酶联免疫仪在波长570 是继一氧化氮和一氧化碳之后的第三类气体信号分子…，对中 处读取吸光度(A)。取8孔A值的均数，按公式：存活率=(实 枢神经系统功能有着重要的调节作用。阿尔茨海默病(AD)是 验孔A均值／对照组A均值)×100％。 一种神经性退行性疾患，其病理特征是脑内呈现老年斑。B一淀 1．4 Hoechst 粉样多肽(AB)是细胞外老年斑的主要成分，对神经元具有毒 性作用，被认为是引起AD的神经元凋亡，从而导致识别能力 予不同的处理因素后，加入新鲜配制的4％多聚甲醛(pH为 Hoechst 下降的主要发病机制之一【2】。有研究证实，脑内的H：s浓度较 7．4)于4℃固定细胞10min，用PBS洗两次，加5me／L 33258染色液染色10min，用PBS洗两次，加封片液封片后用荧 高(可达到160pLmol／L)，并发现AD患者脑内H：s的浓度降低 光显微镜观察、摄片。正常细胞核出现弥散均匀的低密度荧 55％口J。因此，本文推测脑内H：s与AB之间可能存在着一定 的关联，而H：s能否对抗AB诱导的神经元凋亡迄今未明。为光；细胞核呈浓染致密的固缩形态或者颗粒状荧光，计为凋亡 的细胞。 深入探讨H：s在防治AD中的作用，本研究在PCI2细胞建立 I．5 PI染色流式细胞仪检测PCI2细胞凋亡率各实验组按 AB片段(Ap笛．站)致细胞损伤模型，应用NaHS作为H2s的供 体，探讨NaHS是否对AB笛．3，损伤有神经保护作用。 消化贴壁的细胞，l000 1材料与方法 在沉淀中缓缓加入70％冰乙醇固定，慢慢吹打均匀。加50山 1．1 RNA酶至终浓度1g／L，37℃水浴30rain。加PI至终浓度 试剂和仪器甲氮甲唑蓝(M1’I’)、二甲基亚砜(DMSO)、 50 Hoechst me,／L，350目尼龙网滤膜过滤去除细胞团块，4。C避光染色 33258、碘化丙碇(PI)、A阢埘、氢化钠(NAILS)和RNA 30 rain后，上流式细胞仪检测(激发波长：488an)；发射波长 酶购自美国Sigma公司；马血清和胎牛血清购自Hyelone公司； RPMI．1640培养基购自美国GibcoBRL公司。荧光倒置显微镜