结肠癌干细胞样细胞的体外培养、鉴定及n-3多不饱和脂肪酸对结肠癌干细胞样细胞的抗增殖作用.pdfVIP

堡盘查 望! 』 ofPathophysiology 2014，30(12)：2135．2141 · 2135 · [文章编号] 1000．4718(2014)12。2135．07 结肠癌干细胞样细胞的体外培养、鉴定及 n．3多不饱和 脂肪酸对结肠癌干细胞样细胞的抗增殖作用水 方 仕 ， 龙健婷 ， 张 冰。， 杨 婷 ， 卢 味 ， 李鹤平 ， 石汉平 (中山大学附属第一医院 临床营养科，肿瘤科，核医学科，普通外科 ，广东 广州 510080； 中山市人民医院重症治疗科，广东 中山528400) [摘 要] 目的：采取无血清培养法培养出SW620细胞球，并对细胞球细胞进行干细胞鉴定 ；在细胞水平研 究 n一3多不饱和脂肪酸 (n_3PUFAs)对结肠癌干细胞样细胞的作用。方法：正常培养人结肠癌细胞株SW620并使 其逐步适应无血清培养条件，经无血清培养 1周后收集 SW620细胞球。用免疫荧光法检测胚胎干细胞标志物 SSEA一1和TRA-1-81；采用real—timePCR的方法检测干细胞相关基因Sox-2和 Oct-4的表达情况 ；对比SW620贴壁 细胞和干细胞样细胞 (CSCLC)在软琼脂上的克隆形成能力；采用裸鼠移植瘤模型比较2种细胞 的成瘤能力；用 MTS法对比2种细胞在递增浓度的5一氟尿嘧啶(5一Fu)或 mitomycinC处理下的生长抑制情况；用MTS法、Annexin v／PI染色和台盼蓝染色分别观察递增浓度二十二碳六烯酸 (DHA)和二十碳五烯酸 (EPA)作用于 SW620CSCLC 后细胞生长抑制情况、凋亡情况和死亡情况；MTS法检测5一Fu或 mitomycinC联合 n-3PUFAs对结肠癌 CSCLC增 殖的影响。结果 ：无血清培养法成功从SW620中培养出细胞球。细胞球细胞高表达SSEA一1和TRA．1．81并一过 性表达Sox一2和Oct-4基因；对5-FU及 mitomycinC相对抵抗 ；在软琼脂上克隆形成率及在裸鼠皮下的成瘤率均显 著高于贴壁细胞 ，表明这些细胞具有干细胞特性 ，即为来 自于SW620的 CSCLC。DHA和(或)EPA作用于SW620 CSCLC能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡，并能增强5一Fu及mitomycinC对其抑制作用。结论 ：无血清培养法能够从 SW620细胞中培养出具有干细胞特性的细胞 ，它们具有高克隆形成能力及高致瘤性 ，对化疗药物相对抗拒 ；DHA 和EPA能够诱导SW620来源CSCLC发生凋亡并增强化疗药物的抗肿瘤活性。 [关键词】 结肠肿瘤；肿瘤干细胞；无血清培养 ；n一3多不饱和脂肪酸；化学治疗 [中图分类号] R735．34 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．12．004 Cultivationand identificationofhuman colon cancer stem cel1．1ikecells andantiproliferativeeffectsOfn-3p0lyunsaturatedfattyacids FANG Shi，LONGJian-ting ，ZHANGBing ，YANGTing ，LUWei，LIHe—ping ，SHI Han．ping (。DepartmentofClinicNutrition，DepartmentofMedicinalOncology，DepartmentofNuclearMedciine，Departmentof Surgery，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat-senUnivenity，Guangzhou510080，China；IntensiveCareUnit，Zhongshan People’sHospital，Zhongshan528400，China ．E-mail：yangting _ 1234@aliyun．com) fABSTRACT1 AIM ：Tocultivatestem．1