金银花中几种分子的真伪鉴别方法比较及其研究进展.pdfVIP

2014 第十六卷 第八期 -kVo1．16No．8 金银花中几种分子的真伪鉴别方法比较 及其研 究进展六 蒋 超 一，黄璐琦2，袁 媛 2 ，余淑琳2，陈 敏 z (1．北京师范大学资源学院／资源生态与中药资源研究所 北京 100875； 2．中国中医科学院中药资源中心／道地药材国家重点实验室培育基地 北京 100700) 摘 要：中药材的真伪对于中医临床用药具有至关重要的作用。作为中药鉴定的重要组成部分，DNA 分子标记技术 已越来越广泛地应用于中药材的真伪鉴别。近年来，涌现 出许 多中药分子鉴定新方法，但对 于这些新方法的系统比较分析尚未见报道。本文以药材金银花真伪鉴别为例，比较了表达序列标签一简单 重复序列多态性、聚合酶链式反应一限制性酶切长度多态性、位点特异性 PCR、DNA条形码技术和环介导 等温扩增技术的原理、特点、检测方法以及检测时间和应用范围等，并针对各方法的缺陷提 出相应的改进 措施 ，以期筛选到适合金银花快速真伪鉴别的方法，也为其他 中药材分子鉴别研究提供示范。 关键词：金银花 分子鉴定 新方法 SSR 位点特异性PCR DNA条形码 IJAMP doi：10．11842／wst．2014．08．027 中图分类号 ：R284 文献标识码 ：A 中医临床各科治病 、预防疾病均需用药 ，辨证 DNA条形码技术 (DNABarcoding)等。与传统鉴别 施治 ，理法方药 ，最后均落实在中药上。因此 ，历代 方法相比，DNA分子标记不受环境的影响，也不受 医药学家非常重视中药材的质量 ，特别是药材的真 基因表达与否的限制 ，其数量丰富、遗传稳定 2【】，对 假。“一物有谬，便性命及之”，药材真伪不仅关乎治 生物体的影 响表现 “中性 ”，即可以对各发育时期 疗效果 ，而且还关乎患者生命。性状 、显微、理化、化 的个体 、各个组织 、器官甚至细胞进行检测 ，具有 学和生物鉴定构成了现代中药材鉴别方法的五大 快速、微量 、特异性强以及操作简便的特点t3,4】。 领域 ，其中以DNA分子标记为代表的生物鉴定方 与传统鉴别相 比，分子鉴别也存在一些问题。 法已广泛应用于中药材分子的真伪鉴别。 例如 ，RAPD与 ISSR的稳定性较差 ；PCR—RFLP需 目前使用的 DNA分子标记 【]主要包括 随机扩 要进行酶切及 电泳分析 ，实验步骤多 、周期长 ；而 增多态性 DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA， DNA条形码技术等则需要测序仪等大型仪器，且对 RAPD)、聚合酶链式反应一限制性酶切长度多态性 微量体积操作要求较高。此外 ，分子鉴定技术鉴别 (PolymeraseChainReactionRestrictionFragmentLength 单个样 品所 需时间一般大于 2h，与薄层色谱 Polymorphism，PCR—RFLP)、简单重复序列间区多态 (TLC)或显微鉴定 (20—30rain即能获得检测结果) 性 (Inter—SimpleSequenceRepeat，ISSR)、内转 录间 相 比，其鉴别周期 明显延长，难 以满足快速鉴别 的 隔区 (InternalTranscribedSpacer，ITS)序列分析和 要求 ，限制了分子鉴别的推广使用。 因此 ，挖掘和开发新的分子标记 ，尝试建立新 收稿 日期 ：2013—11-02 方法 ，以满足中药材分子真伪鉴别准确 、快速 、高通 修 回 日期 ：2013-12—12 ★ 国家自然科学基金委面上项 目：基于表观遗传学的金银花化学质量变异的分子机制研究，负责人：袁媛；国家中医药管理局中医药行业 科研专项(201407003)：常用大宗中药材质量现场快速检测技术研究，负责人：邵爱娟，袁媛。 ★★ 通讯作者：袁媛 ，副研究员，主要研 究方