2种改进的未知细菌DNA提取方法.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiA ．Sci．2009。37(12)：5381—5382．5607 责任编辑 罗芸 责任校对 况玲玲 2种改进的未知细菌 DNA提取方法 王庆容，李顺，宋培勇，杨秀荣 (遵义师范学院生物系，贵州遵义563o02) 摘要 [目的]研究细菌DNA的提取方法，为未知细菌的研究提供方法支持。[方法]从 DNA的纯度 、基 因组DNA的酶切效果、16SrRNA 基因扩增等方面比较了细菌DNA的2种提取方法。[结果]方法I提取的DNA的纯度(∞260／0D )为 1．51一1．65，6个样品的平均值为 1．56。方法Ⅱ提取的DNA的纯度 (0 ／0 )为 1．25～1．41，6个样品的平均值为 1．33。方法隈 取的DNA纯度较高，但其试验步骤稍微 繁琐。方法Ⅱ的试验步骤稍微简单，但试验时间较长。2种方法均提取到长度大于21ld)的细菌基 因组DNA。对2种方法提取的DNA进 行P(R扩增都得到长度约600bp的条带，效果较好。[结论]2种方法提取的DNA质量均较高，都可以直接用于m 、PCR等研究。 关键词 细茵；DNA提取；聚合酶链反应 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2OO9)12—05381—02 Two ImprovedFAt~ onM ethodsofDNA inUnlmownBacteria 、)l Qing-rongetal (BiologicalDepartment，ZunyiNormalCollege，Zunyi，Chlizhou653002) Abstract JObjectiveITheaimwastostlldvtheextractionmethodofDNAinbacteriasoastosupplymethodologicalsupportforstudyingunknownbacte． ria．1Methodlnle2extractionmethodsofDNAinbacteriawerecomoa~ inaspectssuchaspurityofD A，enzylnedigestioneffectofgenomeDNAand geneamplificationof16SrRNA．[Result]1hepurityofDNA(∞ 260／0 )e)t【Eactedbymethod1wasbetween1．51and1．65andtheaveragepurityof the6sampleswas1．56．mlepurityofDNAextractde byme thod2wasbewteen1．25nad1．41nadtheaveragepurltyofthe6sampleswas1．33．n Ⅲ ． rityofDNAextractdebymethod1washigher，butitsexpeirmentalprocedurewasalitfletedious．1heexpeirmental舯∞ ofmethod2wasa1itfle simple．butitsexperimentaldurationwaslonger．Ihegenome DNA longerthan21kbinbateriawasextractde byhte2me htods．111eb臼l1dswit}lle,ght be about600bpwereobtainde fromd1ePcRamplificationofDNAextractdebythe2mehtodsnadtheiramplificationeffcetswerebetter．1ConclusionJ qualityofDNA extractedbvhte2me thodswas rdativelyhighnadboht ofhtemcouldbe usedinR肿 nadPCR studydirectly． Keywords Bacteria DNAextraction：Polymerasechainreaction 随着分子生物学的不断发展，核酸技术 已在生物学各领 150 溶液Ⅲ，盖紧离心管，颠倒数次混匀 ，冰上放置 10min。 域得到广泛应用，细菌DNA的提取 日益成为一种常规的实 120130r／min离心 5min，取上清液于另一离心管中。向上清 验手段。作为分子生物学研究的第一步，样品DNA的提取