半夏凝集素基因对油菜的遗传转化及REALTIME+PCR分析.pdfVIP

2010．4 作物杂志Crops 半夏凝集素基因对油菜的遗传转化 及REAL-TIME PCR分析 李淑洁 王红梅张正英 (甘肃省农业科学院生物技术研究所，730070，甘肃兰州) 摘要 以甘蓝型油菜陇油2号子叶为转化受 1材料与方法 体材料，通过农杆菌介导将半夏凝集素抗虫基因 1．1材料 (pta)导入陇油2号，经常规PCR检测获得阳性植 株3株。以油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因 1．1．1 油菜材料及其预培养供试材料为甘蓝型 油菜(Brztsswa (pep)作为内参基因、选pta全长序列中高度保守区 napus)陇油2号种子(由甘肃省农业 科学院作物研究所提供)。选取子粒饱满、大小均 域中145bp的pta2为目的片段对转基因植株进行 REAL—TIME PCR分析，初步证明外源pta基因已整 合到油菜细胞基因组中。 Green 关键词 半夏凝集素基因；油菜；SYBR 冲洗3遍，接种于MS培养基。取3～4d苗龄的无 I：REAL-TIMEPCR 菌苗子叶为转化受体材料，接种到预培养基YY(成 分见表1)，25℃暗培养2—3d。 油菜是世界上重要的油料作物之一，主要分布 表1 油菜组织培养及农杆菌转化培养基列表 在中国、美国和加拿大，具有重要的经济价值，开展 培养基类型 具体成分 预培养基 YY：MS+2，4·D 0．2mg／L 油菜基因工程育种有重要的潜在生产应用价值。半 1．0mg／L+6-BA YRI：MS+NAA 分化培养基 0．Im#L+6-BA2．5m∥L ternata 夏凝集素(Pinelliaagglutinin)是一种新的抗 YR2：MS+NAA 0．1ms／L+6一BA2．5mg／L+ 虫资源，研究表明，其粗提液对刺吸式同翅目害虫具 GA30．5mg／L 壮苗培养基 MS 有明显的抗虫性，对麦管蚜、棉蚜和桃蚜等有致死作 MS+NAA 生根培养基 0．1ms／L 用，是一种有重要应用价值的抗虫基因H2J。目前 已得到了转pta基因的水稻日]、烟草HJ、百合”1和苜 1．1．2农杆菌菌株和载体用于本研究的pBIpta一 蓿【6J，pta基因对油菜的遗传转化还未见报道。 1／LBA4404为甘肃省农业科学院生物技术研究所保 SYBRGREENI REAL—TIME 存，重组质粒结构图见图l。 PCR能通过熔解 曲线有效区分特异性产物、非特异性产物以