黄芪莪术配伍对人胃癌裸鼠移植瘤MMP-2表达影响.pdfVIP

果显示，胃康宁高剂量组、中剂量组穿过微孔滤膜的数量明显少于正常细胞组，并具有统计学意义， 说明经胃康宁含药血清处理的癌细胞，溶解基底膜的能力较之正常癌细胞降低，可能影响到癌细胞 分泌蛋白水解酶。癌细胞表面的蛋白水解酶共分四大类，其中基质金属蛋白酶(MMPs)在肿瘤细 胞的浸润和转移中的作用日益受到重视，依据作用底物的不同，MMPs又分为胶原酶(MMPl， 据报导MMP2与胃癌细胞外基质降解关系非常密切，在胃癌组织中的表达活性水平明显高于正常 黏膜。胃康宁抑制胃癌细胞的侵袭能力是否作用于膜表面的蛋白溶解酶或其它途径有待于今后的 进一步研究。 活跃的细胞运动是肿瘤浸润转移的一个重要因素。在1863年，Virchow指出瘤细胞具有阿米巴 形式的运动。肿瘤细胞运动强弱与浸润能力呈正相关。高进等对从小鼠肺腺癌A795分离的不同转 移率的细胞株进行观察，发现转移率高者，其运动性比转移率低者高。因此可以说运动能力是肿瘤 浸润的基本条件，也是转移的关键。本项研究显示，胃康宁含药血清培养胃癌细胞24h后，对照组 细胞划痕区间距缩小显著，甚至几近融合，胃康宁血清高、中、低剂量组细胞划痕区间距仍存在较 大距离，显示胃康宁血清高剂量组、中剂量组、低剂量组细胞的迁移能力明显减弱，胃康宁含药血 清可明显抑制胃癌细胞的运动。影响肿瘤细胞运动的因素包括有生长因子、基底膜刺激、肿瘤细胞 自分泌作用、宿主细胞分泌作用等，在本实验中，由于未应用基底膜、宿主细胞、生长因子等因素， 因此推测胃康宁是通过抑制肿瘤细胞的自分泌作用而影响其迁移能力的。 胃康宁冲剂是中山大学李庆明教授治疗胃癌的经验方，不但在临床上取得了明显的治疗胃癌的 效果，而且通过早期的一系列实验研究，表明该药物对胃癌的生长和转移具有一定的抑制作用，本 项目从细胞水平进一步阐明了其作用机制。 (参考文献略) 黄芪莪术配伍对人胃癌裸鼠移植瘤MMP一2表达的影响 缪春润 沈洪★骆殊朱萱萱 朱学军 刘丽 刘增巍周晓波徐艺 陆为民刘亚军 南京中医药大学附属医院★通讯作者 1材料和方法 1．1实验材料 1．1．1实验动物和药物 动物中心SPF级动物实验室内饲养(动物实验室许可证号为：SYXK(苏)2007—0017)。 药物：黄芪、莪术饮片，江苏省中医院制剂部提供(批号；塞来昔布胶囊(西乐葆) (西尔大药厂波多黎各分厂生产，辉瑞制药有限公司分口包装，批号：BK070711)；罗格列酮片剂 (文迪雅)(天津葛兰素．史克有限公司生产，批号购自江苏省中医院中心药房。 1．1．2细胞株 人胃低分化腺癌MKN45细胞株购自上海研究所。 ．-——270．．—— 1．1．3主要试剂 医用吻合胶OB：由广州自云医用胶有限公司出品，批号：080506。水合氯醛：上海中西药业股 DNA 份有限公司新冈制药厂出品，批号：080310。Maker(Fermentas)、100bp 扩增试剂盒购自上海生工生物有限公司。PCR引物：应用Primer5．0引物设计软件设计后，由上海生 物工程有限公司合成，引物序列见表l。 表1引物序列及长度 1．1．4主要仪器设备 超净台(Forma 海医疗器械厂)，凝胶成像分析系统Tanon3500(上海金鹏分析仪器有限公司)。 1．2方法 1．2．1药物制备 上药物均保存于4。C冰箱中。 1．2．2建立胃癌裸鼠原位移植瘤动物模型 (1)裸鼠于SPF环境进行适应性饲养。 (2)荷瘤鼠制备：取6～8周龄的BALB／c无胸腺裸鼠5只，收集体外培养生长旺盛的连续传 代细胞，调整细胞浓度为lxld7，ml，碘酊消毒裸鼠局部皮肤，用无菌一次性lml注射器以每只动物 取0．2ml接种于右侧近腋部皮下。当皮下移植瘤生长至直径约lcm左右时，无菌操作，剥取出移植 裸鼠腋部皮下，如此反复进行鼠问传代，每代不少于3只动物。本研究以第3代皮下移植瘤为原位 移植的瘤源。 (3)从裸鼠腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的 露腹膜及胃壁，在胃大弯中部的血管丰富处用注射针头小心划破胃浆膜面，用无齿镊略将破损处向 内推压，使局部胃壁形成凹